文档介绍：3D多细胞肿瘤球培养原创-04-20医生科研助手3D多细胞肿瘤球是在体外应用组织培养方法使肿瘤细胞以多细胞集聚体形式生长成为含有三维结构球体。和传统2D贴壁细胞培养模型相比,3D多细胞肿瘤球能够经过模拟三维细胞网络、细胞和基质、细胞和细胞之间相互作用,从而愈加贴近肿瘤组织中对应病理生理特征。所以,3D多细胞肿瘤球培养模型已经逐步应用于干细胞培养和分化、癌症研究、药品和毒性筛选及组织工程等特定应用中。即使3D多细胞肿瘤球模型含有更显著实体肿瘤生理相关性,不过和2D贴壁细胞培养模型相比,取得大量相对统一3D多细胞肿瘤球模型需要一系列培养过程和表征手段。 本文利用LiquidOverlay制备方法,以乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为模型制备3D多细胞肿瘤球并采取倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和环境扫描电镜对其进行具体表征。 (含10%FBS,下同)于50mL离心管内,置于4℃冰箱中预冷;-20℃放入4℃,使其融化成液体状态;,置-20℃冰箱预冷。 (或DMEM培养基)于2个10mL注射玻璃瓶内,加入90mg琼脂糖,盖塞后放入80℃水浴锅内加热溶解30min;,将注射瓶放入灭菌锅内,115℃灭菌30min;,快速取出注射瓶放入超净台内。将注射瓶内琼脂糖溶液倒入无菌加样槽中,用多通道移液器以每孔60μL量加入96孔板内。注意:因为琼脂糖溶液在室温时会凝固,所以从灭菌锅内取出琼脂糖溶液后一定要快速转移至超净台内并快速加入至96孔板中。另外,为确保加样时琼脂糖不冷却,需要同时灭菌加样槽和100μL移液器枪头。,96孔板要保持水平约30min使孔内琼脂糖凝固。 -MB-231细胞(或MCF-7细胞),胰蛋白酶消化后进行细胞计数,用RPMI1640完全培养基(或DMEM完全培养基)×105 cells/mL,备用。,将RPMI1640完全培养基和解冻Matrigel基质胶从冰箱内取出置于冰上。注意:因为Matrigel基质胶在室温下溶液凝固,所以在操作过程中一定要保持低温。。依据计算量(%,v/v)用移液器将300μLMatrigel基质胶加入到12mLRPMI1640完全培养基内,快速混匀。注意:因为Matrigel基质胶在室温下溶液凝固,所以使用移液器枪头也需要预冷。(约600μL),使细胞浓度为10000cells/mL,快速混匀,备用; 4将细胞