文档介绍：临床基因扩增检验操作规范
浙江省基因诊断中心
浙江大学医学院附属儿童医院

尚世强
一、临床基因扩增检验实验室的
规范化设置及其各室的功能
二、各阶段操作要求
三、PCR污染与对策
四、因操作欠规范导致的问题分析
一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其各室的功能
规范化设置:
要求参照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002] 10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》。
1. 四个隔开的工作区域中每一区域都须有
专用的仪器设备。
2. 明确的标记,如加样器或试剂等。
3. 单一方向顺序,从试剂贮存和准备区、标本
制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简
称扩增区)至产物分析区。
4. 使用不同颜色或有明显区别标志的工作服。
5. 实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增
产物分析区的方向进行。
6. 各自的清洁用具。
各室功能:
(一)试剂贮存和准备区
功能:
贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。
戴手套。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。实验台表面,使用可移动紫外灯(254nm波长)照射,一般照射过夜。
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
(二)标本制备区
功能:
临床标本的保存,核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
要正确使用加样器。
正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管。
对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确的样本处理和灭活程序。
用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。
用于RNA扩增检测的样本制备好以后,应立即进行cDNA合成。
(三)扩增区
功能:
DNA或cDNA扩增。