文档介绍：中国人民解放军军事医学科学院
博士学位论文
磷酸化蛋白质组学定性与定量分析技术的研究及在肝细胞磷酸
化蛋白质组学中的应用
姓名:隋少卉
申请学位级别:博士
专业:药物分析学
指导教师:钱小红;王京兰
20070518
摘要于阐明磷酸化介导的生理病理机制。但由于生物体内磷酸化蛋白质的含量及磷酸理解和认识肝脏的复杂功能以及蛋白质的磷酸化修饰在肝脏功能中的意义。本研究分别从定性分析与定量分析两个层面对肝细胞磷酸化蛋白质组进行细胞中磷酸化蛋白质进行了研究。共鉴定到隽姿峄坏恪个磷酸化肽度的狥合嗌字势琢S玫牧姿峄芯坎呗裕ü冉峡疾旆⑾指貌呗圆定量磷酸化蛋白质组研究。共鉴定到个磷酸化位点,隽姿峄亩魏蛋白质的磷酸化修饰在生命活动中具有重要的调控作用,因此也是目前蛋白质组中翻译后修饰研究的熟点,系统地对生物样本中磷酸化蛋白质组的研究有助化位点的化学计量值常常很低,大规模分析磷酸化蛋白质在技术上还很具有挑战性。肝脏在机体生命活动中执行多种重要生理功能,其中许多功能是通过可逆的磷酸化修饰调节的,对肝细胞模型的磷酸化蛋白质组的研究有助于人们更深入地了研究。第一部分以标准磷酸化蛋白及酵母蛋白质为样本,首先优化了富集磷酸肽的掷爰际趼废撸幼挪捎肧—痵—ゲ沟姆治霾呗远匀薈肝段和隽姿峄鞍祝其中%/的磷酸化蛋白和%/的磷酸化位点是狿菘庵忻挥斜ǖ赖摹7治龇⑾制渲行矶嗟鞍字试生物体中发挥着与肝脏的生理和病理密切相关的重要功能。该数据集是目前第一个人正常肝细胞磷酸化蛋白质组的报道,为正常肝细胞与癌细胞对照分析提供了依据。第二部分首先建立了昙堑牧姿峄亩味糠治黾际酰⒍苑椒ㄑЫ了考察和优化。之后建立了猅:戏掷敫患椒ㄓ敫咦既范雀吡槊但能有效地对磷酸化肽段进行富集,而且与”昙嵌考际跫嫒菪粤己茫霉作目前还没有相关文献报道。辅助编写了昙嵌糠治雠涮兹砑﨧现了昙嵌考际跏荽淼淖远肮娣痘W詈蠼鲜鼋⒌狪稵技术路线用于疕一赴P偷亩ㄐ约隽姿峄鞍字サ牧姿峄鞍缀ヒ陨系牧姿峄坏闶狿菘庵忻挥斜ǖ赖摹4覥细胞和赴卸挤⑾諲端磷酸化肽段占很大比例的现象,推断肝细胞中磷酸化修饰有可能更容易发生在蛋白摘要
柔韧性好并暴露在外面的饲颉N榷ㄍ凰乇昙嵌糠治龅玫饺矫娴牟钜定量信息:霾钜炝姿峄坏悖个差异磷酸化蛋白质和个差异非磷酸化蛋白质。还发现有一些磷酸化蛋自质在蛋白水平与磷酸化位点的差异不一致的现象。以上信息的获得为探索由于虻恼隙翲的分子机制,寻找一批与肝细胞癌发生发展紧密相关的高特异性和灵敏性的生物标记物奠定了基础。关键词:磷酸化蛋白质组/Ⅱ
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黻储签字:衄签字日期:坐辍辉旅笕般必堑塑辍!暝碌┒签字日期:型虫年—￡月上二日军事医学科学院研究生学位论文独创性声明发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得芏圭匡鲎盘堂瞳或其它军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解星空匡堂盘堂瞳有关保留、使用学位论文的规定。特授权星主堕堂盘堂瞳可以将学位论文的全部或部分秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风,本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢之处外,论文中不包含其他人已经教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送交国家有关部门和机构。C苎宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ论文作者签字:指导教师签字:签字日期:
日Ⅱ在翻译中或翻译后会在氨基酸链上共价结合各种非肽类基团,形成翻译后修饰,新陈代谢,肿瘤发生等【。系统地对生物样本中磷酸化蛋白质组的研究有助于阐一、磷酸化蛋白覆组学的富集及定性分析量的%,酶切后磷酸化肽段淹没在大量的非磷酸化肽段中,而且磷酸化肽段—▲上..在生物体细胞中蛋白质是主要的功能行使者。出于功能的需要,许多蛋白质目前至少嘀中奘卫嘈鸵驯患ǎ<娜纾毫姿峄⑻腔⒎核鼗亚硝基化等修饰,其中研究最为详细的是蛋白质的磷酸化。据统计,哺乳动物细胞内有三分之一以上的蛋白质可以被磷酸化,而脊椎动物基因组中有サ幕编码蛋白激酶或磷酸酶【俊5鞍字柿姿峄斡氲鹘诹讼赴嘀稚疃蹋括细胞的增值、发育和分化、细胞骨架调控、细胞凋亡、神经活动、肌肉收缩、明磷酸化介导的生理病理机制。本研究包括两方面的内容:磷酸化蛋白质组学的定性分析与差异定量分析。生物体基因组测序的完成,质谱领域新技术的出现以及与质谱数据相关的计算机技术的发展使得大规模蛋白质组分析鉴定工作得到突飞猛进的发展。但一个细胞中的蛋白质可多达上万种,而它们的动态范围又很宽=