文档介绍：天津医科大学
硕士学位论文
尿道致病性大肠杆菌新基因R049的染色体定位及其缺失株构建
的研究
姓名:张维
申请学位级别:硕士
专业:基础医学;病原生物学;微生物学
指导教师:陈锦英
2012-05
中文摘要结果目的对国内临床分离的尿道致病性大肠杆菌中发现的新基因进行染色体定位研究;并敲除基因,构建腞笔е辏=徊窖芯縍虻墓δ艿於ɑ 方法懈锢既旧ā⑸从Α癛虻腜检测以鉴定菌株;。古嘌胄氖栈窬澹崛∠妇旧濉捎酶哐沟F魉婊蚨蟄旧錎,经筛选、纯化和碱变性,构建单链目狻褂么胖楣潭ㄎ目獾牡チ碊,一个磁珠固定一个危⒔与扩增试剂包被于油水混合小滴中独立进行扩增,即油包水,扩增后磁珠将拥有数以万计的相同拷贝。ɡ┰龊蟮奈目獯胖榧尤刖哂泄庀丝椎腜板中,ú庑颍远秆《脸て尾⒂肗软件拼接。圆庑蚴萁猩镄畔⒀Х治觯范ò≧虻腸喙鼗蛱性及其染色体上的初步定位。赨的多重耐药性,利用寺〖际踅玓剐曰蚍直鸩入质粒蚿,进行抗性改造;其后采用低辰谢蚯贸菇腞蛉笔е辍ǚ洗蟪Ω司琾癛騊扩增阳性。袂狗ü菇║染色体单链目夥弦G螅未笮≡范围内。沽姿岱ú庑蚪峁唇雍蠡竦个沃氐,测序覆盖率约为倍,其中一为。较,.与耆旧宓患罨蛄懈叨韧础F中含有基因的翁娲嗟庇赨染色体奈恢茫天津医科大学硕士学位论文訳胍淹瓿苫蜃椴庑虻腢⒉岷牛篊相比,甎
关键词:尿道致病性大肠杆菌基因基因组岛粗刈榭剐愿课ィ蕉司哂姓蛑馗葱蛄校⒂氩迦朐<厦富蚝蛅基因相邻,,扩增含有启动子的抗性基因序列别插入蚿的痑基因中,构建具有抗性的胮、和腞同源重组系统,敲除染色体上的基因;经测序证明与野生株相比相应的位置上基因已删除,保留了鯢位点,命名为。结论甊蚴荱染色体的一淖槌刹糠郑ü菌株间基因水平转移获得,对于致病菌演变的研究具有重要意义。畃和脑旌蟮腞同源重组系统,可用于临床多重耐药菌株基因删除的研究。菇薝的基因缺失株,为进一步基因的功能研究提供了实验基础。造基因敲除天津医科大学硕士学位论文蚿。
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研究现状、成果尿道感染籲琔橇俅渤< ⒍喾⒉。姆病率仅次于呼吸道感染,在临床感染性疾病中居第二位】。大肠杆菌是其主要致病菌,被称为尿道致病性大肠杆菌甤琔。超过%无并发症的蒛穑渲锌删虻郎闲兄涟螂滓鸢螂籽椎腢称为膀胱炎株痪淠蚬苌闲械缴鲈嘁鹕鲇凵鲅祝踔能侵入血流引起败血症的,称为肾盂肾炎株深入探索的致病机制,研究人员发现其与致泻性大肠杆菌、粪便分离大肠杆菌的不同之处在于:菌株具有一系列毒力因子,能突破宿主的免疫防御系统,定植于泌尿道,进而侵入泌尿道上皮细胞导致感染【】。各种菌毛、脂多糖、毒素苎K赜胂赴邓酪蜃,以及载铁体司亍⒊Ω司亍耶尔森菌素染猆玖σ蜃印@纾サ腢鲇凵鲅字昃哂蠵菌毛,在上行性泌尿道感染和肾盂肾炎的发病中起着重要作用:大部分还具有途ǎ赨ㄖ灿诎螂撞⒌贾掳螂籽坠讨蟹⒒又匾W饔肹。但是仍有约一半的菌株缺乏己知毒力因子,寻找新毒力因子的工作受到广微生物基因组计划启动后,年完成了世界上第一株大肠杆菌娜ɑ蜃椴庑颍俳顺Φ劳庵虏⌒源蟪Ω司家族的主要成员和代表的致病机理,功能基因组,抗感染免疫及其疫苗等相关研究。目前,肾盂肾炎分离株虲膀胱炎分离株株已经完成了全基因组测序。与非致病性大肠杆菌相比,基因组超出前者%以上【浚杏行矶啾嗦胄列功能未知,其中极有可能包含新的致病基因。完成全基因组测序的闡幕蜃榇笮「饕靃:为,嘤υ斐善浠蚴坑胫掷嗟那穑肾盂肾炎分离株的烤捅萓多觥O妇氖视π越化过程中,细菌基因组上外源性基因插入形成马赛克结构的现象,具有重要意义;菌株间呈现出显著差异,推测即是由于不同菌株间通过基因水平转移天津医科大学硕士学位论文月舌泛关注。甤
研究目的、方法,获得外源性嗡拢妇ü鼿获得相当数量的遗传物质,其占细菌染色体的比例可达%【】。本研究采用的滋旖虻厍鲇凵鲅追掷胫辏銹菌毛的主要结构蛋白为停琍菌毛尖端的黏附素为型,是国内优势流行型代表株【В牍釻鲇凵鲅啄P途闖型/蚉、。本课题组的前期工作采用细菌染色体抑制性消减杂交技术訳为,以完成基因组测序的非致病菌甤为,构建罴跷目猓秆》⑾至薝特异片段浚枚涡蛄在数据库中无同源序列。采用基因组步移技术,在片段基础上,双向延伸获