文档介绍：超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用超滤管，常见MilliporeAmicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号、不一样体积大小和MWCO超滤管可选，视目标蛋白分子量和浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可反复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结使用方法和注意事项。
1、选择适宜超滤管，关键考虑MWCO和浓缩体积，最常见是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较适宜呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目标蛋白分子量1/3，比如目标蛋白分子量为35kDa，就能够选择10kDa截留分子量超滤管。若目标蛋白分子量为10kD左右，则能够用截留分子量3kD超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对多种化学物质耐受程度有所不一样，表格中有。
2、新买来超滤是干燥，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入多少，以不超出管顶白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者全部要达成平衡。注意转速和加速度不可太快，不然直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不一样离心机转速 rpm换算成g以后，有所不一样。具体可参阅附件里说明书。离心机加速度调至最低级，减小对膜压力。注意，一定要等离心机达成目标转速以后，方可离开离心机，不然离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可估计！膜和转轴方向根听说明书调整（角转离心机情况是膜和轴垂直）。在实际使用中，通常转速开比说明书里要低，这么能够延长离心管使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判定超滤管是否遗漏蛋白。假如管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要正确判定是否漏管，用5mg/mlBSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下蛋白液浓缩（在冰上操作，预防蛋白受热），直到全部浓缩液全部加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，造成堵管。若发生沉淀，要确定沉淀具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不适宜；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度措施处理，后者方法是换不一样Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，假如要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右时候，轻轻加入新Buffer（），再浓缩至1ml左右，连续三次，最终一次浓缩终体积依据需要蛋白浓度而定，通常不多于500ul，也有浓缩至200ul以内情况。根据每次最少10倍左右体积浓缩算，三次达成1000倍以上，基础上能够达成换buffer目标。
6、取出最终蛋白浓缩液操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸收浓缩液，每次吸靠近200ul，直到吸完。管底剩下最终一点浓缩液无须吸收，不然难度太大，有可能损坏超滤膜。最终加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，预防膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，反复利用超滤管步骤。
8、倒出超滤管里水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见蛋白沉淀，能够先加入水