文档介绍：福建医科大学
硕士学位论文
光动力疗法对Jurkat细胞和HEL细胞作用的研究
姓名:赵晓燕
申请学位级别:硕士
专业:@
指导教师:黄慧芳吴勇
2011-04
光动力疗法对 Jurkat 细胞和 HEL 细胞作用的研究
研究生:赵晓燕导师:黄慧芳吴勇
中文摘要
目的:探讨新型酞菁类光敏剂 ZnPcH1 介导的光动力疗法(ZnPcH1-PDT)
对急性白血病(acute leukemia, AL)细胞株的杀伤作用,为 PDT 应用于 AL
自体骨髓体外净化提供理论依据。
方法:以人急性 T 淋巴细胞白血病 Jurkat 细胞株和人急性红白血病 HEL
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细胞株作为研究对象,研究 ZnPcH1-PDT 对 AL 细胞株的杀伤作用。4×10 /ml
的细胞分别与终浓度为、、、µmol/L 的 ZnPcH1 共孵育 5h,
用 670nm 的激光以的功率密度、的能量密度照射,同
时设立 RPMI 1640 空白对照组、光敏剂对照组、光对照组,以排除单纯
ZnPcH1 或单纯光照因素对 AL 细胞的作用。首先采用台盼蓝拒染法、MTT
比色法和集落形成实验等方法检测 ZnPcH1-PDT 对 Jurkat 细胞和 HEL 细胞
增殖能力的抑制作用;接着应用 AO/EB 荧光染色法、DNA 片段化分析、
Annexin-VFITC/PI 双染流式细胞术等方法分析 PDT 作用后 Jurkat 细胞和 HEL
细胞的死亡方式;最后,运用 Western blot 方法检测 PDT 作用后 AL 细胞株
Akt 蛋白、磷酸化 Akt 蛋白(P-Akt)、P-GSK3β蛋白、P53 蛋白、Bax 蛋白、
热休克蛋白 70(Heat Shock Protein 70,HSP70)和 Bcl-2 蛋白等表达的变化,
旨在初步探讨 PDT 杀伤 AL 细胞株的分子机制。
结果:①台盼蓝拒染法、MTT 比色法和集落形成实验结果均显示
ZnPcH1-PDT 对 Jurkat 细胞和 HEL 细胞有显著杀伤作用,PDT 对细胞增殖
的抑制作用随着光敏剂 ZnPcH1 浓度(、、、µmol/L)的增加
而增强(p﹤);而光对照组、光敏剂对照组的细胞增殖活力与 RPMI 1640
空白对照组相比无显著性差别。②AO/EB 荧光染色法显示在 PDT 作用后 6h,
Jurkat 细胞与 HEL 细胞的形态开始改变。随着时间延长,细胞大小、形态
的不均一性逐渐明显;胞核呈致密浓染或碎片黄绿色荧光,凋亡细胞逐渐增
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加。Jurkat 细胞的形态变化较 HEL 细胞更为显著:在 PDT 作用后 24h,Jurkat
细胞可见较多的发出黄绿色荧光的细胞核或核碎片,即晚期凋亡的坏死细
胞;在作用后 36h,镜下所见到的均是坏死细胞;荧光显微镜下计数结果显
示:PDT 作用后 6h、12h、24h、36h 的 4 个时间点,Jurkat 细胞中凋亡细胞
所占的比例分别是 ±%、±%、±%、±%,坏死细
胞所占的比例分别是 ±%、±%、±%、±%;HEL
细胞中凋亡细胞所占的比例分别为 ±%、±%、±%、
±%,坏死细胞所占的比例分别是 ±%、±%、±%、
±%。③DNA 电泳结果显示:ZnPcH1-PDT 作用后 6h,Jurkat 细胞就
开始出现典型的 DNA 降解“梯状”条带;而 HEL 细胞在 PDT 作用后 12h,
才开始出现“梯状”条带。④Annexin-VFITC/PI 双染法流式术结果显示 PDT 作
用后细胞发生凋亡,且凋亡率呈时间(6h、12h、24h、36h)依赖性增高:
ZnPcH1-PDT 作用后 6h、12h、24h、36h,Jurkat 细胞的凋亡率分别为 ±
%、±%、±%、±%;HEL 细胞的凋亡率分别为
±%、±%、±%、±%。⑤Western blot
的检测结果显示:在 Jurkat 细胞中,PDT 处理后 6h,HSP70 蛋白、抗凋亡
蛋白 Bcl-2 和 P-GSK3β蛋白表达下调;PDT 处理后 12h,Akt 蛋白、P-Akt