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小鼠脾脏细胞悬浮液的制备
取已经免疫的小鼠，剪尾取血，并分离血清供作为阳性对照。
小鼠颈椎脱臼处死， 75%乙醇浸泡 5 分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左 腹侧朝上；
在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；
在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分 离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏；放入盛有 5ml 不完全培养液的培养皿 中冲洗，剥去其周围的结缔组织。
A 、梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸 入离心管 中，自然沉降 5 分钟，将悬液移至另一 离心管 中，弃去较大的组织块， 离心沉淀细胞；
B、 钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，用注射器针芯 轻轻研压脾脏，获细胞悬液；
C、 酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入 400 u/ml胶原酶（III型）5ml/只
脾脏， 37 度消化 20 分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。
注：1•一般6-8周龄小鼠，根据品系不同，可得 5-20 X107细胞/只小鼠；
：术前高压灭菌外，也可将手术器械泡在 95% 酒精的小容
器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简 便。
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