文档介绍：Menke体外产气法（Syringe系统） 管子
（一）基础知识
体外产气法主要理念
通过体外产气装置模拟瘤胃发酵
体外产气系统组成
体外产气装置：产气管（相当于独立的瘤胃） 、恒温水浴摇床（模 拟瘤胃温度和蠕动速度）；微生物培养液：由瘤胃液与人工唾液按 1:2的体积比混合，搅拌均匀而成
影响实验成败的主要因素
实验过程中产气装置的温度，整个操作过程的厌氧状态、微生物 活力是影响实验成败的关键
（二） 试验前准备
试配产气管 ①更换注入口处老化的塑胶管； ②试配外管和内塞， 要求推拉自如又不过松 （现
已将可匹配的外管和内塞统一编号，依号装配即可） 。
称量样品 ①产气管编号；②用自制的带长柄的称量纸，准确称取待测样品约 200mg（ DM），
置于体外产气管底部，注意不要让样品进入产气管注入口和沾染 30ml以上管壁；③样品称取
完毕后，管塞上均匀涂抹凡士林，将管塞塞回对映的外管，扣好夹子。
配制原液 正式实验前一天，配制好人工唾液中的微量元素溶液（ A液）、缓冲液（B液）、常
量元素溶液（C液）和刃天青溶液（D液）（可过量配制，常温下存放，配制方法见附表 1 ）。
其它 ①调试恒温水浴摇床的温度至 39 ± 05C，摇动速度5X 10转/min，如果使用两个恒温
水浴摇床要求两者温度和摇动速度尽量一致，另外还需要将一多联水浴锅温度调至 39±
（以实际量取温度为准）；②准备二层、四层、六层纱布各 2-4块（纱布可重复使用）；③贮备
两瓶热水，准备收集瓶（收集和过滤瘤胃液用） 、水桶、温度计，以备次日取瘤胃液用。
（三） 正式试验
配制人工唾液 ①将恒温水浴摇床、多联水浴锅打开后；②计算人工唾液需要量：体外培养 时每根产气管内微生物培养液的体积是 30ml （10ml瘤胃液和20ml人工唾液），依据试验设计
的产气管数计算人工唾液和瘤胃液的需要量（预留 20%，以备操作手法不当造成浪费）；③配
制还原剂（E液，见附表1）；④按附表2的顺序和比例将配制好的各原液混合后，置入水浴 摇床或水浴锅内，通入 CO2气体（气流不易过大），使人工唾液由蓝色转变为粉红色，最终为 无色。
采集与处理瘤胃液 为方便读取12h产气量，瘤胃液最好在 7:30前取回。所取瘤胃液为早饲
前2h瘤胃液。①到牧场后，将热水倒入水桶，调节水温度至 39±,用于瘤胃液保温（应
经常用热水调节）；②用真空泵抽取三只湖羊的瘤胃液，混合，倒入收集瓶（注意盖上瓶盖， 以防氧气对微生物的影响）：③回到实验室后，将收集瓶置于水浴锅内，四层纱布过滤（应尽 量快，以保持微生物的活力），获得的滤液用CO2气体饱和；④用量筒量取所需量的无色人工 唾液和瘤胃液混合，不间断地通入 CO2气体。
吸取微生物培养液用空的产气管吸取微生物培养液 30ml，通过三通管推入已经装有样品的
产气管。
记录初始微生物培养液量 排气过程：将注入口处夹子打开的同时，用手下拉管塞，以防样
品冲入塑胶管；摇晃产气管使样品与瘤胃液混合后，旋转管塞，排出管内空气；读数：将产 气管竖直，注入口向下，读取刻度。排气后的产气管应随机置于恒温水浴摇床内培养（摇床 在操作过程中处于摇动状态，以免温度上升） 。
空白对照和标准对照
实验过程中要有至少 3个空白对照和3个标准干草对照（样多时，对照一定要多，尤其是空
白对照）。空白对照不加样品直接加入 30ml微生物培养液，标准干草对照以 200mg （ DM ）干
草（优质的过80目筛的羊草）为底物，加入 30ml微生物培养液。为了消除操作顺序和恒温
水浴摇床条件的差异，要求空白对照和标准对照平均分布于试验前期、中期和后期，放置于 水浴摇床的不同位置。
垂个过程要尽量快，特别是吸培养液和排气，最好不要超过 15min [
记录产气量 培养2、4、6、9、12、24、36、48、72、96h时（试验样品为粗料，一般培养
到72h或96h ;精料一般培养到 24h或48h即可终止培养，若要计算产气常数，一般要 72h），
记录产气管的刻度读数（读数时轻摇产气管，旋动管塞后读数，读数时，以管塞刻度的中部 为准）。如果产气量过多，下一时间点产气量可能超出刻度范围，则需放气，其操作与排气相 同。
产气量计算GPt型Vt Vo GP空白（管子）
W 白
式中，GPt为样品在t时刻的产气量（ml）;Vt为样品发酵t小时后，产气管刻度读数（ml）； V0为样品在开始培养时产气管刻度读数（ ml）; W为样品干物质重（mg）； GP空白为空白对照
在t时刻的产气量，其计算方式与 GPt 一致。
重复试验 要求体外产气试验至少培养两次，两次标准干草产气量相对偏差小于 10% （若