文档介绍：重庆医科大学
博士学位论文
抗肿瘤新药德氮吡格的蛋白质组学研究
姓名:袁拥华
申请学位级别:博士
专业:药理学
指导教师:余瑜
20070501
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%覩基质辅助激光解析,电离微粒体甘油三酯转移酶固醇调节元件结合蛋白低密度脂蛋白受体脂滴肝芴飞行时间质谱分子量磷酸盐缓冲液蛋白二硫键异构酶磷酸葡萄糖酸脱氢酶相对等电点肽质量指纹谱呀饧せ畹鞍硬脂酸辅酶去饱和酶十二烷基硫酸钠榛蛩崮凭郾酰胺凝胶电泳三氯乙酸四甲基乙二胺三氟乙酸甘油三酯德氮吡格三羟甲基氨基甲烷—Ⅳ匝‘:哇.—重庆医科大学博士研究生学位论文艉/
墼兴坑哪盘轶先掌冢生里重庆医科大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名:,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,,:本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即:,,,可以采用影印、:日
抗肿瘤新药德氮吡格的蛋白质组学研究’摘要步维艰。目前用于临床的抗肿瘤药物存在的主要问题是:选择性差,本课题研究的德氮吡格,亲灾鞔葱律杓合成的氮杂甾烷类化合物。经体内、外实验证明,德氮吡格具有良好的抗肿瘤作用,能显著延长荷瘤动物的生存期,且无交叉耐药性。在德氮吡格对人肝癌细胞的实验中,观察到德氮吡格引起肿瘤细胞内大量脂滴聚积的特殊现象;基因芯片筛选出的众多差异基因中以脂代谢相关基因变化最显著。由此,我们提出德氮吡格可能通过影响肿瘤细胞的脂代谢达到抗肿瘤的目的,但其分子作用机制有待进本文拟采用蛋白质组学方法,比较德氮吡格给药前后人肝癌细胞的蛋白质差异,探索德氮吡格影响肿瘤细胞脂代谢产生脂质聚积的特殊现象,以及抗肿瘤作用的机制,望能找到德氮毗格作用的靶点,为抗肿瘤药物研发提供新思路。癌症对人类的威胁日益严重,而人们在攻克癌症的征途中,却举对实体瘤作用不佳,易产生多药耐药性等。一步研究。本文完成的主要工作和结论如下:林课题受国家自然科学基金嗪,重庆医科大学优秀博士学位论文科研基金资助重庆医科大学博士研究生学位论文
⒔⒘巳烁伟┫赴鸔南赴⑾赴ぁ⑾赴说鞍质组双向电泳分离技术。采用亚细胞抽提试剂盒提取各亚细胞组分,上样缓冲液重悬样品,进行双向凝胶电泳。结果显示:联合使用丙酮、%两性电解质欣诘鞍椎娜芙猓竦酶嗟牡鞍仔畔ⅲ斐龅南胞浆蛋白点可达,细胞膜蛋白点可达±,细胞核蛋白前后的人肝癌细胞的细胞浆、细胞膜、细胞核蛋白,用螅赴牟异表达蛋白点有个,细胞膜的差异表达蛋白点有个,细胞核的结果鉴定出个差异表达蛋白,其中包括与脂质合成有关的个蛋白,与脂质降解有关的龅鞍缀陀胫首T擞泄氐个蛋白。在这些差异蛋白中与脂代谢有关的蛋白变化最明显,蛋白质组学研究以不同的方法除盐浓缩蛋白质样品,然后,分别采用两种不同的水化三氯乙酸的除盐效果好,样品损失少;采用上样缓冲液疞尿素疞硫脲%/疞点可达⒗蒙鲜鼋⒌、寻找二倍以上的差异表达蛋白。结果显示:德氮吡格作用于人肝癌细胞差异表达蛋白点有个,共计差异表达蛋白点有觥⒔岷匣蛐酒个差异表达蛋白点中筛选出个细胞浆蛋白点、个细胞膜蛋白点、,数据库鉴定。结果与基因芯片研究结果一致。重庆医科大学博士研究生学位论文
上游调控因子和脂质转出途径关键蛋白进行研究。后,的表达增加,的表达降低,蛋白水平的验证结果与比较蛋白质组学的分析结果一致。从蛋白质水平上,这进一步支持德氮毗格抗肿瘤作用的主要机制是通过干扰肿瘤细胞的脂代谢。⑼ü鲜霾钜斓鞍椎墓δ芊治隹芍#碌_粮穸灾琢鱿赴谢调控所导致肿瘤细胞内脂质大量聚积可能通过以下几条途径:.骺氐牡ü檀己铣稍黾油揪叮由此可知,德氮吡格除通过途径增加胆固醇和甘油