文档介绍：南京医科大学
博士学位论文
紫外线辐射对皮肤细胞作用的蛋白质组学研究
姓名:陈斌
申请学位级别:博士
专业:皮肤性病学
指导教师:毕志刚
20060420
——————————————————————————————————————————————————一一诙θ趇砌固捣冰梯度英文缩写注释砥吣鞋触激露聚两烯酰胺凝胶电泳震谱离飞行时阈展谱肽质嚣指纹图谱碳酸酾酶勿毡柰躤読馥璻丝鬣羧蛋蠹酶搬燃穞骾泛紊羧基末端水解酶攀圩。砖篶缸鄀晦豦ょ畲双向凝胶电泳等电聚焦十二烷基磺酸钠基质辅助激光解吸电紫外线孛蔽紧跨线长波紫外线热体克蛋白羲麓糖璃节蛋自活性氡簇微管相美蛋白醛壤酶磷酸丙糖异构酶磷酸甘油酸变位酶酸性核糖拔璐白体蛋白因予超家族蛋白—.我阦南京隈科大学博凰籇甈甌矗坩猤缸畦曩程雘轇Ⅱ。搪遗瞫穚驻恕
紫外线辐射峙皮肤细胞作用的蛋白质组学研究毕志刚教授中文摘要随著地球臭氧层更藩,紫外线辐射对人类鹳镄害越采越失。皮获是直接受翻紫外线辐射的器官,受到一定剂量的紫外线辐射詹,导致了表皮和真皮细胞的广麓对皮默的影响霹益戴为当今世器炭跃学莽霹究的重点参热点。鬟窍,锥蛋溆紫外线对皮肤各种损伤的分子机制涉及到多种基因、多种蛋向分子、多条信号传导遇臻,而簧统秘棱拳手段只霹一令或凡拿爨予透蟹霹究,泰能鼠细胞嫠侉水平研究紫外线辐射对皮肤影响的各种发病机制,也未能系统地说明紫外线辐射皮肤中不问相关因子间的相互作用及其途径,因而需要一种整体的高通量的技术方法,全瓣拳统逸据霹紫跨践鬟耱螃发获斡终霁以人类基因组“工作框架图”完成为标志,生命科学已进入了后基因组时代,生命科学研究的重心已从揭示生命的所有遗传信息转移到在分子整体水平对功能砖蓐浚ξ〔咀嗾匦锌汲鞍字剩虼耍芯坑晒Α欤セ鞅嗦牒头译的蛋白质,已成为生命科学研究的迫切需要和新的任务。由此产生了一门新兴学科~一蚤白质组学。蛋白艨级是摇基固缎辑表达的全部蛋白鏖。蛋巍痿组学楚研究细胞、纽织或机体在转定的时间和空闻上基霹纽活跃表达的全部荣白质的料学。不同于传统的单个蛋白质成某一类蛋由质研究,蛋白质组学是研究细胞内所有器白质及其动态变化规律的耪学,它是在蛋白霞水平定量、动态、蘩体的研究生物体,傻卦更深层次上获得对生理、疾病过程以麓调控网络的广泛而完整酌认识。因而蛋白自每澳大刹豫学者提出蛋白质组概念以采,蛋白质鳃举日益成为避几年来国玲皮获学研究的热点。国内蚕镪震组学在皮陵方面的辑窥尚楚起步阶段,而国内蛋白质组学在紫外线对皮肤作用方面的研究还未见报道。本研究应用蛋白质组学双向电泳技术、质谱技术以及计算机数据处理技术分离:和鏊定萦外线诱导酶炭嫦哥牟罹吮硭俚把欤拥鞍渍鹑辔飨低车匮型紫外线辐射对皮肤的影响,从而能够动态、鏊体、高通量地探讨紫外线对皮肤博士研宛生陈斌导泛损伤,最终引起皮肤炎疟反应、免疫抑制、皮肤癌变及皮肤光麓化。紫外线照的研究目前主要集中在探讨上述各病理反应的分子机制方面。质组学技术是一种整体性、高通量、系统性研究方法。师南京氍科大学博貉宦畚
蘟行对趣錋￡一弼鼹谱分专幸鉴定。结果:竞损伤酌务秘发病机制及英相互作燃途径,为进一步寻找皮肤竞损伤的诊断特异柱标志茨药耢防治的耘点钉下基赫。研究分为上下两篇共六个部分,主要研究内容和结果如下:上篇:皮肤细胞蛋白震组学技本平台的构建第一部分:人皮获霸震影戍细跑蛋白艉缎双向凝黢电泳获术跨逡立与傥弛采用体外培养角质形成细胞辏怨滔鄍荻纫灰籌胶条械谝幌虻鹊缇劢梗詓%唤航械诙蚍肿痈哟怪钡缬荆以上双囊凝狡电泳戆美犍露素与环节,如样品楚躐、上祥量、迤;泳参数、凝薹吏浓度和旱缬救旧ǚ椒ǖ冉幸怀辛械奶跫呕=峁航⒉⒂呕似し角质形成细胞蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,成功地得到了重复性较好戆角震形成细憨鼹双向凝吏电泳霉诺,并堤高了英分簿率。第二部分:皮肤成纤维觚胞与角质彤成细胞蛋白质妞双向电泳图谱的比较建立弼于皮获蛋白震蕴学霹究鳇荅图谱数糖分镑系统,暴臻罄霸双向凝胶电泳分离人皮肤成纤维细胞岛角质形成细胞的总蛋白质,获得分辨率高且重复性较好的人皮肤成纤维细胞与角质形成细胞的双向凝胶电泳图谱数据库,然后罔麋錱图像分橱软传透行比较分辑,谈并《嚣孝阉差雾表述吩蛋白质。结暴:《人皮肤成纤雏细胞凝肢的乎均蛋白质点数为骄脚±,乎均甄配的点数势渎实%。《氛夤冉戏治錾鲜隼种细胞的双向凝胶电溱图谱,得到平均匹配蛋白点数为2钜毂碓说鞍点数为觯渲个点仅在成纤维细胞中表达,龅憬鲈诮侵市纬上胞中表达,畹阍诔梢镂赴形8弑碚猓个点在成纤维细胞中为低表遮。上述结果表明两种皮获主要结秘细胞之间存农很多差秀表这的蛋白质。第三部分:皮肤细胞萤缸质组质谱分橱方法的建童残肽质量指纹毽谱的构建体,檠似ぴ境尚肺赴虢羌ㄐ纬上哥模u畋⑤賞荻人夏旱泳分离其慈爵白质,凝胶经考马斯亮蘸染色詹,在图谱上进取鼋侵市纬获得畹愕幕耩袅苛梦魄科