文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
用于防龋DNA疫苗粘膜给药的阳离子脂质体载体的研究
姓名:奚颖霞
申请学位级别:硕士
专业:生化与分子生物学
指导教师:甘璐
20090518
华中科技大学硕士学位论文
摘要
基因治疗成功的关键是需要高效、安全和靶向的载体系统,将 DNA 转移至靶细
胞核内进行表达。阳离子脂质体是用于基因治疗中最有前景的非病毒载体系统之一。
阳离子脂质体DNA 复合物,也叫脂质复合物,是自组装纳米体系,能将 DNA 输送
至多种类型的细胞中。在本研究中,我们制备了 DOTAP/DOPE 脂质体,对其与 DNA
的相互作用进行了理化表征,并研究了它们的体外转染效率。完成的工作包括以下
几个方面:
(1)薄膜超声法制备 DOTAP/DOPE 阳离子脂质体,考察确定了此工艺中水化
时间与超声时间,并对制得的脂质体的粒径分散性、zeta 电位分布、形貌以及初步物
理稳定性进行表征。结果表明此制备工艺有较好的重复性。最后制得的阳离子脂质
体平均粒径为 ± nm,PDI 为 ±,zeta 电位为 ± mV。在 4
℃或 37 ℃贮存 1 个月后,其胶体稳定性较好。
(2)制备了阳离子脂质体DNA 复合物,并考察了复合物的理化性质。粒径和
电位测试、琼脂糖凝胶电泳的结果表明在 N/P 比为 以上时,DNA 与阳离子脂质
体形成了稳定且带正电的复合物。核酸酶酶切实验的结果表明复合物能保护 DNA 抵
御核酸酶的降解。我们还对在生理离子强度下制备的复合物进行粒径和电位考察,
结果表明在 N/P 比为 3 以上时,复合物带正电,且复合物颗粒有成簇聚集现象。此
外,我们对动物实验要求的脂质复合物的制备进行摸索。
(3)通过对 CHO 和 NIH-3T3 细胞的 MTT 细胞毒性和转染实验表明,复合物
的细胞毒性较小;阳离子脂质体可以将 DNA 转移到两种细胞内得到有效的表达,转
染的最佳 N/P 比为 到 2。在 CHO 细胞中的转染效率比 NIH-3T3 细胞中高。
综上所述,DOTAP/DOPE 阳离子脂质体与 DNA 通过静电作用自组装形成的复
合物,能有效介导基因的体外转染,为后续的研究打下良好的基础。
关键词:非病毒载体阳离子脂质体DNA 脂质复合物转染
I
华中科技大学硕士学位论文
Abstract
It is a key factor for essful gene therapy to develop efficient and safe gene
delivery carriers that can transfer DNA into the nuclei of the target cells. Cationic
liposome is one of the most promising nonviral systems for gene therapy. Cationic
liposome/plexes,also known as lipoplexes,are self-assembling nanosystems.
They can transfer DNA into a large variety types of cells. In the present study, we prepared
DOTAP/DOPE liposomes, characterized the interactions between these cationic liposomes
and plasmid DNA by physicochemical researches, and studied their transfection efficiency
in vitro. The main results are as follows:
(1) DOTAP/DOPE cationic liposomes were prepared by the method of film
dispersion in addition of sonication. We investigated the time of hydration and sonication
of the preparation technology. Several data were characterized, such as particle size and
zeta potential distribution,morphology, a