文档介绍：复旦大学
博士后学位论文
前列腺癌细胞凋亡通路基因表达研究
姓名:陈辉熔
申请学位级别:博士后
专业:外科学(泌尿外科)
指导教师:夏术阶
20040801
前列腺癌细胞凋亡通路基因表达的研究背景:早期前列腺癌可采取根治性手术和放射治疗,而晚期前列腺癌尚无治愈性疗法。去势对晚期前列腺癌仅为缓解性治疗,激素敏感细胞在低水平雄激素作用下最终转化为激素不敏感细胞。由此人们一直在探索晚期前列腺癌更有效的疗法,包括基因治疗、免疫治疗、皿管形成抑制剂、放疗联合去势和新的化疗药物等,这些治疗的最后结局就是癌细胞死亡,可表现为被动坏死和主动凋亡两种形式。晚期前列腺癌非手术疗法目前包括去势、放疗和药物化疗三大基本疗法。凋亡是所有多细胞动物共同进化的保守生命活动,在机体发育和严格调控组织细胞平衡等基本生命活动中,通过启动凋亡程序来清除多余和无用的细胞。凋亡是一个受多基因严格调控的过程。凋亡在前列腺发育、上皮正常更新以及去雄激素后前列腺细胞萎缩等生理和病理过程中发挥重要作用,凋亡异常也与前列腺癌的发生和激素依赖性转化有关。目的:本研究针对晚期前列腺癌这一治疗难点,在凋亡研究的先进理论基础上,在以下方面进行了深入研究:芯考に孛舾杏氩幻舾星傲邢侔┫赴蛲鐾坊虻谋泶铮教旨に孛感与不敏感前列腺癌细胞凋亡抵抗性差异的基因基础。芯咳バ奂に亍⒎浜兔淄休祯ǘ郧傲邢侔┫赴蛲鐾坊虮泶锏挠响,探讨其协同诱导凋亡作用及其基因基础。芯垦5蛲鱿喙鼗蛟谇傲邢侔┫赴妥橹械谋泶锖鸵庖澹教种要凋亡相关基因在前列腺癌俅采系挠τ眉壑怠材料与方法:蛲鲇盏技羍分别作用前列腺癌激素敏感与不敏感细胞中文摘要
和一兰鄣蛲龇从π浴J占疞和一赴筇崛∽躌,合成探针并以生物素标记,在凋亡通路特异基因寡核苷酸片段膜上进行杂交反应,检测基因表达。淄休祯ā⒎溆肴バ奂に刈饔们傲邢侔┫赴鸏,笛楹偷蛲针,在凋亡通路特异基因膜上进行杂交反应检测基因表达,并以淄休祯饔肔细胞,收集良性前列腺增生组织和前列腺癌组织,提取细胞总琑狿分别检测泶铮瑂ḿ觳釲细胞抗原的表达。和,以及、,显著上调的基因为A街窒赴苛冶泶淄休祯ê头溆肴バ奂に胤直鹂尚盏记傲邢侔┫赴蛲觥C淄休醌使蚝蚑騧泶锷系鳎涫笵、和基因表达上调,。赴槐泶蛲鐾坊虮泶锔谋溆肭傲邢侔┫赴蛲龇从π圆煌泄兀蛲鐾细胞染色分别评价细胞毒性和诱导凋亡作用。收集细胞提取总⒑铣蒭确认表达。结果:均能诱导两种细胞凋亡,但细胞的凋亡反应性小于细胞。与赴冉希琍细胞显著下调的基因有、表达上调,使蚑騧泶锵碌鳌一乖结论:蚑。
基因表达差异是凋亡反应性差异的基础。淄休祯ɑ蚍溆肴バ奂に囟郧傲邢侔┫赴蛲鐾坊虻谋泶锔谋洳同,这与两者协同诱导凋亡作用有关,表明调控凋亡通路基因表达是一种协同放、化疗或内分泌治疗的有效策略。抗原。赴⒘夹郧傲邢僭錾颓傲邢侔┳橹泶颰凋亡发生有关,提示谇傲邢侔┫赴嫘藕诺拇ǖ葜杏兄匾W饔茫前列腺癌临床诊断、预后评估和治疗等方面均具有重要的潜在应用价值。关键词:前列腺癌细胞凋亡传导通路基因有肿B急荆琓杀泶颣,且与蚑,
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第一部分激素敏感与不敏感前列腺癌细胞凋亡通路基因的表达及与凋亡抵抗性差异的关系凋亡是所有多细胞动物共同进化的保守生命活动,在机体发育和严格调控组织细胞平衡等基本生命活动中,通过启动凋亡程序来清除多余和无用的细胞。凋亡在前列腺发育、上皮正常更新以及去雄激素后前列腺细胞萎缩等生理和病理过程中发挥重要作用,凋亡异常也与前列腺癌的发生和激素依赖性转化有关。凋亡从启动到撮终完成是一个包括抑制和促凋亡基因严格调控的过程Ⅲ。本部分旨在研究激素敏感与不敏感前列腺癌细胞凋亡通路基因的表达,探讨激素敏感与不敏感前列腺癌细胞凋亡抵抗性差异的基因基础。椒材料和试剂嘌含谷氨酰胺⑻ヅQG、磷酸缓冲盐蚏提取试剂盒购自荆嗔疵顾睾虷鹤許公司。其他细胞培养耗材购自尽I锼匾籨昙莄秸牒铣墒约梁、化学发光检测试剂盒以及凋亡通路特异基因寡核苷酸基因鹤許尽5蛲鲇盏技镣仄艘旃姑窱种萍凉臼乙叉甙鹤訠尽细胞和一赴鹤灾锌圃荷海生化细胞所。凋亡分析肿瘤细胞在含还劝滨0贰让鸹頕、痬嗝顾亍痬疵顾鞯呐嘌褐校%跫鲁9娲ù嘌O赴×痬接种于孔培养板培养小时后,分别作用、和小时。处理后的细胞以%甲醛固定分钟,次,
染色种印Sü庀晕⒕紫外滤光器下观察细胞,凋亡细胞表现为细胞核呈亮蓝色和胞核缩小,坏死细胞无染色,正常细胞呈淡蓝色。每个实验组均设复孔,随机观察个视野并计算凋亡细胞百分率,重复问笛椤总崛每种细胞以/接种于装濉E嘌天后