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Feulgen反应
实验目的
了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。

实验原理
DNA可在酸性条件下水解，嘌呤—脱氧核糖之间的糖苷键断开，形成醛基(—CHO)，再用显示醛基的特异性试剂Schiff试剂处理，形成光镜下所见的细胞核内紫红色反应产物。DNA 经稀盐酸处理而水解。除可破坏脱氧核糖与嘌呤碱外，还可水解嘧啶碱。酸水解核酸的程度与水解时间长短有关，随着水解时间的延长，嘌呤碱基增多，形成的醛基也随之增多，Feulgen反应加强。如果水解时间过长，DNA将完全水解，反而使Feulgen反应减弱。DNA水解时间因组织种类和固定液不同而异，需通过预实验找到合适的水解温度和时间。由于Schiff试剂能与醛基结合，故不能用含醛的固定液固定组织，常用Carnoy固定液。Bouin液不适用于Feulgen反应，因为固定液中含较多的酸，可将DNA水解，影响染色反应。
Schiff试剂是显示醛基的特异试剂，其反应原理是碱性品红(为红紫色)经亚硫酸处理后变为五色Schiff液，Schiff液遇到醛基时，则被还原形成原有的颜色，即红紫色。碱性品红结构中的醌基是碱性品红中具有紫红色的核心结构，经亚硫酸处理后，则醌基两端的双键打开，形成五色品ii-硫酸复合物为Schiff试剂。如果加热使SO逸出，则恢复品红原2来的颜色而失去对DNA的染色效果，故配好的Schiff试剂应避免SO逸出。 2

Feulgen反应原理

实验仪器、材料及试剂
（一）仪器、用具
显微镜、恒温水浴箱、温度计、解剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。
（二）材料
（见图2－1）（见图2－2）或根尖洋葱鳞茎
（三）试剂
1．1MHCl的配制
。
2．Schiff试剂的配制及保存
（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮 5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1MHCl，冷却至25℃时， Na2S2O5（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24小时（有时需2～3天），使其颜色退至淡黄色，，用力振荡1分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可再用。
3．亚硫酸水
取200ml自来水，加10ml 10%偏重亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 1M HCl，三者于使用前混匀。

实验步骤
1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1M HCl中，加热到60℃水解8～10 min。
2．蒸馏水水洗。
3．Schiff试剂遮光染色30min。
4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。
5．水洗5min。