文档介绍：中华人民共和国农业行业标准玉米品种鉴定肝品椒中华人民共和国农业部发布——发布——实施．
刖罱本标准的附录、9娣缎愿铰迹铰糄为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国植物新品种测试标准技术委员会归口。本标准起草单位：北京市农林科学院玉米研究中心、农业部科技发展中心。本标准主要起草人：赵久然、王凤格、郭景伦、吕波、胡长远、堵苑苑。—／
玉米品种鉴定肝品椒—本标准规定品种肝萍ǖ氖笛榉椒ḿ芭卸ū曜肌本标准适用于玉米自交系和单交种的品种鉴定，其他杂交种类型及群体和开放授粉品种可参考本下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单话ǹ蔽蟮哪谌或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。．┳魑镏肿蛹煅楣娉糖ぱ．甘匙魑镏肿雍坦壤—植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则从玉米种子、幼苗、叶片等组织中提取肧引物进行┰觯煌罨ざ鹊腜扩增产物通过聚丙烯酰***凝胶电泳分离，并通过染色显示肝破状嘈汀２煌衩灼分钟捎谝糯组成不同，基因组屑虻ブ馗葱蛄械闹馗创问胁钜欤庵植钜炜赏ü齈扩增、电泳、染色程序获得的肝仆计准右郧郑佣圆煌分纸屑ā瞧魃璞讣笆约仪器设备及试剂名单见附录相关溶液配制方法见附录每份送检样品至少检测龈鎏澹砸恢滦圆畹难酚υ黾蛹觳飧鎏逯鲆陨稀Ｈ绻觳馄分为自交系，应剔除杂交种个体；如果检测品种为杂交种，应剔除自交系个体。成对品种的比较：送检样品提供两份，一份为待检品种，一份为对照品种。将待检品种与对照品种直接进行成对比较。品种与肝瓶馊肟馄分值谋冉希核图煅诽峁┮环荨＝ù煅酚隓指纹库所有入库品种的指纹进行比较，筛选出指纹最相似或相同的品种作为待检品种的近似品种，然后将待检品种与近似品种直接进行成对比较。段标准。娣缎砸梦募芤号渲僮鞒绦样品准备⊙分直冉戏绞崛／
反应液体积为止，组分配制应符合表墓娑ā—提供两种崛》椒ǎ直鹗视糜诓煌氖导市枰!方法一：剥取单粒干种子的胚，放入离心管中，加入***仿后研磨，加入崛∫，混匀后于胄锨逡杭尤朐は茸坝异丙醇和芤旱．止离心管中，待赏藕筇舫觯ヒ掖枷吹雍蠹尤冲液浞秩芙夂蟊赣谩Ｊ视糜谛枰狣提取量大和长期存放的情况。方法二：剥取单粒干种子的胚，或将玉米种子发芽，当玉米幼苗长度达到左右，每株幼苗，剪碎，将样品分别放入孔深板中，每孔加入梗瓺提取液兴尤缓竺靠自俜直鸺尤止，缓冲液苯尤止，进行┰觯℃保存。适用于需要高通量快速提取的情况，同时适用于种子和幼芽崛 基本核心引物名单见附录．从μ逑┰龇从μ逑止，鲅罚姹湫嫱嘶嫜由鲅罚嫜由保存。变性聚丙烯酰***凝胶电泳．逑床ＡО用自来水沾洗涤灵将玻璃板反复擦洗干净，双蒸永擦洗两遍，％乙醇擦洗两遍，干燥。在长板上涂上亲和硅烷工作液，带凹槽的短板上涂剥离硅烷工作液。操作过程中防止两块玻璃．樽暗缬景待玻璃板彻底干燥后组装电泳板，并用水平仪调平。％胶中加入ス蛩犸Ц杆倩煸群蠊嘟骸４毫鞫到下部，在上部轻轻插入梳子，使其聚合至少陨稀９嘟汗讨蟹乐钩鱿制荨在正极槽虏中加入撼逡，在负极槽喜加入预热至的罷缓冲，拔出梳子。愎β试さ缬取┰．表／止．从Τ绦℃预变性板互相污染。．嘟在．さ缬液反应体积反应组分原浓度终浓度疞引物／／，×／疞，×帕疞
为、⋯，。，⑷范ù砻刻跗状囊惶妆曜计分帧Ｃ扛龃馄分衷诿扛鲆镂坏闵系钠状庞在止分屑尤／—良友撼逡海煸群螅赑仪上运行变性程序：℃变性用移液器吹吸加样槽，清除气泡和杂质，插入样品梳子。每一个加样孔点入样品。愎率电泳至上部的指示带妆角到达胶板的中部糰。电泳结束后，小心分开两块玻璃板，凝胶会紧贴在长板上。潭ǎ汗潭ㄒ褐星崆峄味；，矗核羲焖倨次，不超过染色：染色液中染色矗核羲焖倨矗奔洳怀．杂埃合杂耙褐星崆峄味链瞥鱿郑．ㄓ埃汗潭ㄒ褐卸ㄓ以多数个体具有的谱带谥鞔魑F分值奶卣髌状如果检测品种为自交系，应剔除杂交种个体；如果检测品种为杂交种，应剔除白交系个体蔽薹ㄅ卸现鞔保龈髦制状嫉谋嚷省谱带记录方式：每个核心引物的所有谱带按扩增片段从大到小的顺序编号，用二位代码描述来四位代码描述，对照标准品种确定待测品种的谱带号。先用对基本核心引物检测，获得待测品种在个引物位点的肝破状荩个位点的肝破状萁衅分旨浔冉希品种间差异位点数≥卸ㄎ2煌分郑品种间差异位点数，判定为相近品种；品种间差异位点数，判定为疑同品种。，詁蚦锨榭觯匾J奔绦岳┱购诵囊锝屑觳猓鑫坏愕腄指纹谱带数据进行品种间比较：品种间差异位点数，判定为近似品种；品种间差异位点数，判定为相同品种或极近似品种。鉴定报告鉴定报告书格式参见附录湫，胬淙陨稀缬银染．矗核羲峁芭卸数据表示检测及判定标准示例涸谝桓龊诵囊锷辖鲇幸惶跗状分衷诟靡镂坏愕钠状胛示例涸谝桓龊诵囊锷嫌辛教跗状分衷诟靡镂坏愕钠状胛／；
×缓冲液：不含；—娣缎愿铰