文档介绍:1、 细胞收集
细胞培养至对数或稳定期前期(1-3 x 107),吸取1ml, 8000-12000g离心2min收集菌体细 胞。
2、 细胞裂解
加入 1ml 裂解液,轻柔吸打,使细胞悬浮。细胞壁裂解,释放 DNA
3 、 去除杂质
10000g离心2min,去除大部分细胞碎片、多糖、 RNA等,吸取800卩I上清液于新的离心管 中(不要吸到沉淀) 。
4、 基因组DNA提取
上清中加400卩I无水乙醇,反复颠倒混匀 1-3min,至出现白色云雾状 DNA沉淀。4000g离
心2min沉淀DNA,弃上清(倾倒时小心,勿将 DNA倒掉)。
5、 DNA的清洗
沿管壁加入1ml75%乙醇,颠倒混匀30s, 12000g离心5min。弃上清(底部白色沉淀为 DNA), 尽量将液体全部弃除。
6、 DNA溶解
风干15s后加入100卩I无菌水,轻轻弹动管底,使 DNA全部溶解。
电泳检测
1 、 细胞收集 细胞培养至对数或稳定期前期( 1-3x 107),吸取 1mI, 8000-12000g 离心 2min 收集菌体细 胞。
2、 细胞裂解
加入 1mI 裂解液,轻柔吸打,使细胞悬浮。细胞壁裂解,释放 DNA
3 、 去除杂质
10000g离心2min,去除大部分细胞碎片、多糖、 RNA等,吸取800卩I上清液于新的离心管
中(不要吸到沉淀) 。
4、 基因组DNA提取
上清中加400卩I无水乙醇,反复颠倒混匀 1-3min,至出现白色云雾状 DNA沉淀。4000g离
心2min沉淀DNA,弃上清(倾倒时小心,勿将 DNA倒掉)。
5、 DNA的清洗
沿管壁加入1mI75%乙醇,颠倒混匀30s, 12000g离心5min。弃上清(底部白色沉淀为 DNA), 尽量将液体全部弃除。
6、 DNA溶解
风干15s后加入100卩I无菌水,轻轻弹动管底,使 DNA全部溶解。 电泳检测