文档介绍：中山大学
博士学位论文
斜带石斑鱼P450芳香化酶基因克隆及其表达调节的研究
姓名:张勇
申请学位级别:博士
专业:生理学
指导教师:林浩然
20040501
论文题目:斜带石斑惫芳香化酶基因克隆及其表达调节的研究雄性激素甲麓辈酮和芳香化酶掷制剂来曲囔诱导了湫贝通过搀建雌雄嗣傣雌,黢先熟豹斜繁匿斑鱼弦茅霜憋艨文簿,竞隆褥到了斜带石斑熊芳香化酶蒸豳脑型蚉绯残全长;应用一步法结合咏坏姆椒ǎ芯苛苏饬街址枷慊冈羚裁带石斑鱼缝织中兹交达揍搋霸在瓤艟发育过程中戆表达猜况:逮过投暖外灏通过半定量方法舞究了下丘麟、脑垂体和瞧艨中芳善化酶激,捡测了刺激惹芳香纯酶静表达盘况;著硬究了不弱湿度器测激怼驻黪发全长为,开放读码框编码个氨基酸;全长为,开放读码框编码龅;,纛不是来源予潮~个基霞豹不弱剪接。氨基酸序列分析发现这两种芳香化酶都具有芳香化酶的功能匿:袭嘶峁π芟潮U邃谕芪—。蓿推湎獠鸵《柚显把斜带石斑鱼蚉分别归炎为硬骨鱼脑芳香化酶和硬骨专业:生理学林浩然院士摘要鱼发生性别转变,研究了悭转变过程中成清中性类网醇激素虴谋浠榭觯的表达情况,并结合离体孵育的方法检测了性腺中芳香化酶活性的变化;燎、蚆炔煌に囟韵虑鹉浴⒛咱仗搴托韵俳欣胩宸跸龃育过程中芳香化酶表达的影响。%,表明斜带石斑鱼两种芳静化酶欠菪琌疭肽区,芳香化区和豫铁血红素结台区。斜带石斑鱼的同源性为.%,证明两种芳替化酶具有同等的功能。进化树分析结聚明鱼舞鬃芳番讫酶。博士生:张勇导师:
中大量表达;但在前脑、后脑、下丘脑和血液中表达较低;在心脏、肝脏、肾脏、发育而降低,到囊胚期则检测不到。当胚胎发育到尾芽期时再次出现,并随之缓都不能检测得到,但是到尾芽期和负跬笨J急泶铮⑶已杆偕/的饵料投喂天,可诱导湫贝哂闾崆胺⑸员杂交显示斜带石斑鱼芳香化酶蚉在脑、卵物,但是在脑和肾中都检测不到。一步法结果显示,斜带石斑鱼芳香化酶蚉在生殖系统和非生殖系统都有表达。在嗅球、前脑、中脑、下丘脑、延脑、垂体、鳃丝、鳃软骨、肾脏、肌肉、脂肪、血液中大量表达:但在后脑中表达较低,卵巢中更低;在心脏、肝脏、在卵巢、垂体、脾脏、鳃丝、鳃软骨肌肉和脂肪组织中检测不到表达。证明斜带石斑鱼芳香化酶泶锞哂凶橹匾煨裕惺共煌墓δ堋在未受精卵中可以检测得到,视为母体信息,随着胚胎慢升高。与煌琍从未受精卵开始到尾芽期之前高隤相比较诜趸蟮淖杏阒卸寄芗觳獾玫絇和的表达。转变。在性转变过程中,处理组血清中性类固醇激素肯灾撸含量没有较大变化;下丘脑中芳香化酶表达的显著升高和性腺中芳香化酶泶锖突钚缘南灾档汀用含来曲哗痥亩贤段龄斜带石斑鱼天,也可诱导其提前发生性别转变。在性转变过程中,处理组血清中肯灾撸含量显著降低,下丘脑中芳香化酶表达的有所升高,性腺中芳香化酶泶锖突钚缘南灾档汀离体孵育显示,在下丘脑和脑垂体中对芳香化酶表达无明显作用;但在脑垂体中,能显著增加芳香化酶达。这可能是由于增强脑垂体中姆置冢佣贾路枷慊表达没有明显变巢和肾中的不同表达。在下丘脑和肾中检测到一个一的B疾物,但是在卵巢中检测不到;。用含的表泶锏脑銮浚欢枷慊窹Ⅱ
胚胎发育时期泶锪拷系陀泄亍6鳳谂咛テ谥饕用于性腺却无这种刺激作用,因此,也可能是通过调节脑垂体中驳姆置表达有明显的促进作用,胚胎发育时期关键词:斜带石斑鱼;细胞色素芳香化酶;性类固醇激素;基因表达化,推测是由于其表达调节方式与幌嗤珿可能不能促进其表与在体实验不同,单独孵育下丘脑、脑垂体和性腺,对芳香化酶的表达都无明显作用。显示可能不是直接作用于芳香化酶基因,而是通过调单独孵育下丘脑和脑垂体对表达有明显的抑制作用,这可能是由于的负反馈作用,从而抑制脑芳香化酶能促进斜带石斑鱼脑垂体中芳香化酶甿谋泶铮侵苯幼从而导致脑中芳香化酶泶锏脑銮俊一定浓度的鱼用人绒毛膜促性腺激素梢栽銮柯殉卜枷慊谋泶锖突钚裕嬖诩亮恳来婀叵岛褪奔湟来婀叵担庵苯拥闹っ髁亩訮的调节作用。低温能增强胚胎的表达,但是没有显著差异,这可能和作用是促进姆⒂晕露榷源耸钡腜表达影响不大。雌激素对胚胎的表达随着浓度的增加而增强。雌激素对的表达没有影响,而且在胚胎发育过程中,保持较低水平。节其他因子而发生作用。的表达。与调控达。Ⅲ
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言引况㈣。在性分化时期的一段时间内,鱼类生殖细胞保持着向雄性或雌性发展的两种可能,外源的性类固醇激素可以在这段时间内诱导许多鱼类幼鱼的性