文档介绍：E3白
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第八章食品中致病菌和病毒
肠杆菌科是存在于人和动物肠道或自然界中的
群生物学性状很相似的革兰氏阴性短小杆菌。
无芽孢,多数有周身鞭毛,能运动
在普通培养基上能生长。
>培养温度为35%C。
需氧或兼性厌氧。
能还原***盐为亚***盐,氧化酶试验阴性,
触酶试验阳性。
。一般情况下
多不致病,是人和动物肠道中的常居菌。
在一定条件下,可引起肠道道外感染。
>致病性大肠杆菌:肠产毒性大肠杆菌
( Enterotoxigenic );肠致病性大肠杆菌
( Enteropathogenic E coli);肠侵袭性大肠杆菌
( Enteroinvasive );肠出血性大肠杆菌
( Enterohemorrhagic )。引起腹泻、出血
性肠炎。
肠产毒性大肠杆菌( Enterotoxigenic E
coli, EtEC)
今引起婴幼儿和旅游者腹泻,出现轻度水
泻,也可呈严重霍乱样症状。腹泻常为
自限性,一般2-3d即愈。
◆鉴定ETEC主要测定大肠杆菌肠***,
血清型有一定的参考意义
肠致病性大肠杆菌
令肠致病性大肠杆菌( Enteropathogenic E
coli,EPEC是婴儿腹泻的主要病原菌,
具有高度传染性,严重者可致死,***
少见。EPEC产生VT***。VT***具有
神经***、细胞***和肠***性。
☆鉴定EPEC根据临床表现和血清型。
肠侵袭性大肠杆菌( Enteroinvasive ,
EIEC)
EIEC的多数菌株无动力,生化反应和抗
原结构均类似痢疾杆菌。
EIEC可引起豚鼠角结合膜炎,临床上可
借此协助鉴定EIEC。
肠出血性大肠杆菌
>肠出血性大肠杆菌( Enterohemorrhagic ,
EHEC可引起散发性或爆发性出血性结肠炎。主
要菌型是O157:H,还可有O26、O1、O1a3、
O145等。
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1996年O157:H在日本引起万人的食物中毒,此
外,美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、英国等国
家和地区相继报道了 EHEC O157:H的散发性感
染和爆发流行。
我国于1999年在苏、皖、鲁、豫发生爆发流行。
肠出血性大肠杆菌O157:H的检验方法
培养基制备
改良EC新生霉素增菌肉汤(mEC):EC肉汤灭菌后添
加20mgmL过滤除菌的新生霉素,使终浓度为20pg/mL。
改良山梨醇麦康凯琼脂(TC-SMAC):山梨醇麦康凯琼
脂加入过滤除菌的1%亚碲酸钾溶液,,
头孢克污,使终浓度为005mg/。
MUGⅠST肉汤:IST肉汤中添加4***伞形***→β-D-葡萄
糖醛酸苷(MUG),。
2、增菌培养
·称取25克样品放入225 mL mEO中,均质。于41±1℃培养
18-24小时。
3、分离
将mEC肉汤培养物10倍递增稀释。从104,105,10°稀释度,各取
0m涂布于 TC-SMAC平板。于36±1℃培养18-24小时
可疑 EHEC O1;H1菌落扁平,透明或半透明,边缘光滑,呈淡褐色中
,直径约2
4、鉴定
挑取TC-SMAC上的可疑菌落,接种 MUG-LST,于36±1℃培养18-24小
时,出现产气,且无荧光者,分离到普通营养琼脂
对纯菌落用 EHECO1s:H标准血清或胶乳凝集试剂作凝集试验,必要时
进行生化试验
在检测过程中,也可以在选择性增菌后,取出5mL增菌液,经100℃水
浴15分钟灭活后,供自动酶联荧光免疫测试( VIDAS),迅速获得初步
结果,阳性反应者需作进一步证实
EHEG0157:H检验程序图解
检样25g
mEC225mL→酶联荧光免疫测试 VIDAS快速筛选
↓41±1℃,18-24h
10-,105,10·稀释度涂布 TC-SMAC
↓36±1℃,18-24h
挑取5-10个可疑菌落接种MUG-LST
↓36±1℃,18-24h
MUG阴性培养物转种普通营养琼脂
生化反应鉴定血清凝集鉴定或胶乳凝集试验