文档介绍：江苏大学
硕士学位论文
人肾癌干细胞的培养鉴定及其端粒酶活性的研究
姓名:田福起
申请学位级别:硕士
专业:外科学
指导教师:孙浩
20100608
└上赴蚝蜕霭┫赴摘要目的:通过对人肾癌细胞的无血清培养获取肾癌干细胞,找出入肾癌干细胞的成熟的培养方法;进一步检测肾癌细胞、肾癌干细胞中端粒酶的活性,从而探讨端粒酶活性在肾癌发生、发展及治疗方面的重要意义。碱性成纤维生长因子,/嘌扪G逍∨嘌掷肷霭└上赴⒐鄄炱渖特性;通过流式细胞仪检测其谋泶锴榭黾捌涞蛲雎剩以正常肾组织细胞及肾癌细胞作为对照,采用端粒重复序列扩增的方法,凳倍考觳馍霭结果:肾癌干细胞接种于/扪G迮嘌螅赴圆形悬浮于培养液中;旌笥邢赴蛏桑扛鱿赴蚝—鱿胞,折光性较强;旌笙赴蛎飨栽龆啵寤龃螅9嬖虻脑残或卵圆形。无血清培养的肾癌干细胞球。率明显高于含血清培养的肾癌细胞‘率,凋亡率较血清培养的。肾癌细胞低;正常肾组织细胞未检测出有癈谋泶铮呒浔之间端粒酶活性无明显差异。结论:与含血清培养的肾癌细胞相比无血清悬浮培养的肾癌干细方法:利用含有表皮生长因子扎、干细胞端粒酶的活性。粒酶活性均高于正常肾组织细胞.,,而前二者江苏大学硕士学位论文
胞表面标志矢弑泶铮凶沤系偷牡蛲雎剩叨肆C傅幕性均高于正常肾组织细胞。关键词:肿瘤干细胞,肾癌,端粒酶,凋亡,珻江苏大学硕士学位论文
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以及细胞组织中微环境的变化,最终导致了肿瘤的发型。肿瘤细胞即使有不同刖肿瘤干细胞是存在于肿瘤中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体,它具有自我更新的能力,能形成不同分化程度的肿瘤细胞,是肿瘤不断扩大的源泉。干细胞,且焕嗑哂卸嘞蚍只蹦芎妥晕腋粗颇芰Φ南赴处于未充分分化状态,尚不成熟,具有再生各种组织器官和人体的潜在功能,被医学界称为“万用细胞”。在特定的条件下,它可以分化成具有不同功能的细胞,形成多种组织和器官。根据干细胞的来源及分化潜能,干细胞大致可分为:胚胎干细胞,和成体干细胞胚胎干细胞是指受精卵发育到桑椹胚的最原始的细胞,可以在体外长期培养,无限增殖,并保持全能的特性,在合适的条件下可以分化为胎儿或者体内所有组织类型的细胞,包括生殖细胞。成体干细胞为特定组织干细胞,指存在于胎儿和出生后个体的不同组织中的具有自我更新、多向分化潜能和增殖特性的细胞,对其所在的组织器官有着重建和修复的功能。干细胞都具有自我更新、多向分化潜能及不死性蠊餐匦近年来,肿瘤与千细胞的研究倍受关注,人们发现干细胞和肿瘤细胞具有许多共同的特性,还可能有类似的细胞表面标志。Ⅸ衔V琢銎鹪从谡8上胞遗传突变的积累,又提出了肿瘤形成的二次打击学说,认为干细胞是突变的靶标【,干细胞也许是能够长时间存活并接受所有突变的唯一一种细胞,而成熟体细胞的突变不会形成肿瘤,因为成熟细胞寿命短,仅分裂几次就死亡了,而干细胞却具有几乎无限的“自我更新芰ΑS捎诙啻我糯槐涞睦刍的分化表型,也是干细胞先发生突变,然后传给分化的子代细胞,子代获得自我更新能力,在此基础上又发生其他突变形成转化细胞。随着干细胞生物学和肿瘤学的深入研究,等从干细胞和肿瘤细胞部分相似的生物学特性出发提出了“肿瘤干细胞假说”认为肿瘤组织中存在极少量的具有无限增殖和分化潜能的肿瘤干细胞,正是这群特异性细胞促使肿瘤的产生和江苏大学硕士学位论文青,。.▲上狫一.
发展。年,大学的研究小组【渴状未尤橄侔┲蟹离出干细胞,他们利用流式细胞仪从乳腺癌患者乳房切除的标本制成的单细胞悬液中筛选出表达粘附分子、橄伲殉舶┨匾煨员昙和上皮细胞特异性抗原南赴⑷薔/小鼠体内,小鼠长出肿瘤,证明了这部分细胞具有肿瘤源性。染匀死嗉毙运栊园籽2珹纳钊胙芯浚唤鍪状稳啡狭巳死嗉毙运栊园籽2≈肿瘤干细胞琇的存在,并将其成功分离出来。他们通过对具有不同表面筛选标志的白血病细胞进行原代克隆培养,发现细胞表面标志为。。,在流式细胞分析中,他们发现在两个发射波长和蓝下,有一类特殊的小细胞群不能被ü馊玖先旧ǎ饫嘞胞不仅表达干细胞表面标志/,也具有长期增殖的造血干细胞特性,在体内移植增殖实验中平均扩增倍数约为倍,在造血干细胞研究中,这些低荧光染色称为细胞。目前,现象己成为干细胞研究常用的分选方法。到目前为止,人们已成功的从造血系统恶性肿瘤、乳腺癌和脑肿瘤患者组织【康榷嘀肿橹蟹掷氩⑴嘌龈髯缘闹琢龈上胞。越来越多的事实表明,肿瘤组织中存在着肿瘤干细胞,肿瘤干细胞是肿瘤生长、侵袭、转移和复发的根源,而肿瘤干细胞则是机体的正常干细胞或者其前体细胞在一系列内外因素的作用下增殖分化失常形成的,因此,肿瘤是一种干细胞疾病,