文档介绍：北京协和医学院;中国医学科学院
博士学位论文
cAMP受体蛋白调控鼠疫耶尔森氏菌毒力的研究
姓名:占玲俊
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:秦川;杨瑞馥
20090301
巡鐾佳蛋自调撞鼠蕉噩丕蠢医蕉耋左鲍班荭篈受体蛋白调控鼠疫耶尔森氏菌毒力的研究性战剂之一,还是恐怖分子制造生物恐怖的首选微生物之一。鼠疫在中国的流行鼠疫的病原菌是鼠疫耶尔森氏菌韵录虺剖笠呔,在自然界,鼠疫的主要宿主是啮齿动物,主要通过节肢动物蚤的叮咬在宿主之间传播。通过蚤叮咬或鼠疫菌从鼠蚤传播到新的宿主过程中,经历了温度,渗透压,离子浓度,,氧等信号的改变,鼠疫菌必须适应相应的环境压力才能存活并维持其毒力和致病性,而每个适应性反应也必然伴随着鼠疫菌基因转录的改变,这体现在:很多特定的调控子,分别感应特定的外界信号,介导特定基因ǘ玖表达的精细调控机制的研究。通过体内的报告基因融合实验证明詐,起始位点,核心启动子元件和岷衔坏阈蛄校沂旧鲜龌虻钠舳忧线显示谋对鍪奔涑び赪迥谑笛橹っ髌は峦揪陡腥臼蓖槐渲甑亩玖中文摘要鼠疫是一种烈性自然疫源性疾病,人类历史上,曾经发生过问笠叩氖澜性大流行。自上世纪年代以来,鼠疫的发病呈上升趋势,年开始,世界卫生组织笠吡形V匦绿返拇静 A硗猓笠呔谴车纳也很严峻,疫源地约占国土面积的%,主要分布在我国的西北部,对人们的生命和财产造成巨大的威胁。者其它途径,鼠疫可以传染给人,引发腺鼠疫、肺鼠疫和败血症鼠疫。上调和下调,最终组成复杂的毒力调控网络,控制鼠疫菌在媒介和贮存宿主中生存能力和致病力。受体蛋白作为细菌调控子能调控的喔龌颍ú斡敕纸獯灰种频幕颉T诒臼笛橹校颐枪菇耸笠菌甑腸突变株突馗粗辍Mü迥谕獾亩玖Ρ硇褪笛橹な盗亩玖Φ骺乇硇汀@〉骺卦!T诖嘶∩希选取水平转移获得的毒力相关的质粒基因琯和操纵子进行和有直接调控作用,然后分别用引物延伸实验和慵J笛确定上述毒力基因启动子区的转录结构图。表型实验显示耐槐湓谔迥诤吞逋饩跋焱槐渲甑纳ぃ逋獾纳で比相应的野生株下降了,啾叮猜鐾揪陡腥臼保槐渲甑亩玖Υ笤枷
定位功肠,技粗孟褼矽船刁,僮葑拥淖B计鹗嘉降了倍。因此鞘笠呔玖λ匦氲模⑶以谄は赂腥就揪吨懈匾!体内实验证实槐渲甑纳ぜ趼赡苁堑贾铝街指腥就揪吨型槐渲甓玖跞的部分原因。而相应的回复株能恢复笔е甑亩玖Ρ硇停锏接胍吧甑亩的促进鼠疫菌从外周感染部位は赂腥尽咎槎R或者吸入┥ⅰR陨系氖大大降低该突变株在皮下感染途径中的毒力。在本实验中,用鼠疫全基因组芯片采用双色荧光的比较芯片表达谱实验分析中的鼠疫菌田鼠型的野生株和△。秆〕个差异表达基因,其中相比于野生株,。序匹配分值高为界值幕蜃魑:蜓】赡苁蹸直接调控的靶基因。后子受苯拥骺兀钩闪耸笠呔鶦的最小调控元,其中男酒泶锲结果与实时定量不一致,而虽然芯片表达谱,实时定量,实验并未发现詙兄苯拥骺刈饔茫虼苏饬礁龌虿皇荂调控元。Γ琾和的融合实验证实冲能正调控水平获得的质粒基因Γ琾,点,核心启动子元件停和岷衔坏悖咭黄鸾沂玖薈逵雙肠,瑂舳覦相互作用的结构图。的坏憔挥谄舳忧纳嫌危琧瓹与启动子鼠疫菌中的,和基因组成一个三联体的操纵子,说明位点钦嬲腃位点,,,蛃舳忧湓种鼠疫力表型一致的水平。先前的实验证明由嗦氲南宋鞍酌冈せ罴聊芴匾煨验证据都说明槐渲曛衟的表达缺失除了能降低体内的生长表型外,还能生长在下调。汇总甤岷闲蛄忻扛鑫恢盟母黾罨鱿值娜ㄖ兀玫紺褰岷闲蛄械腗利用程序查找霾钜毂泶锘蛑械谋J谻基序,找至个与基续的实时定量和凝胶阻滞实验显示有个基因或者假定的操纵以及足迹实验都证实可能为骺卦#镅由旌蚻ǜ婊蛉诤而负调描。通过引物延伸实验和慵J笛岷虾螅俳鳵聚合酶的转录,表现为激活转录作用。操纵子上仅有一个受骺氐钠舳樱瞧舳由嫌个岷衔坏位点臀坏⑶抑辉谖坏上找到耐葱蛄校用。垒△丛￡鐾佳蛋自遢撞鼠瘗韭筮鑫医苴壹左殴硒究Ⅵ
【关键词】:鼠疫耶尔森氏菌,转录调控,玖蚣樱琾,赡艿牡骺卦!=岷舷嘤Φ奶迥谕獗硇褪笛椋徊街な挡⒕秆芯苛薈菌生物型中,即古生型,中世纪型,东方型和田鼠型,是相当保守的。因此,本研究中的田鼠型鼠疫菌的结果可以普遍运用于其它鼠疫生物型中。通过上述实验,不仅首次界定了鼠疫菌田鼠型的钚〉骺卦#撇獬直接调控毒力基因琹蛃操纵子的机制。玖Φ骺刈用的确定,为鼠疫菌的药物的研制提供了新的靶点,必将对鼠疫的防治起重要的积极作用。堂尘壁璺馇蛋自遢蕉匦瘴墅丕鑫医苴耋左殴硒冠
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