文档介绍：靶向种品切∠赴伟┫赴隼嗽学位申请人导师专名称指教答辩委员会主席答辩委员会成员论文评阅人年日广州业课题来源:广东省自然科学基金南方医科大学级硕士学位论文·
邢駿抑制非小细胞肺癌细胞增殖的研究硕士研究生:孙艳芹指导教师:郭琳琅教授摘要一、研究背景最新统计资料显示,在欧美发达国家和我国城市中,肺癌已位居男性恶性肿瘤发病率、死亡率的首位,女性恶性肿瘤发病率的第二位,死亡率的第一位。目前肺癌的发病率正呈不断上升的趋势,其中非小细胞肺癌.,约占全部肺癌的%以上。肺癌的分子流行病学研究发现,烟草或工业废气等环境致癌物质,可作为支气管和肺泡上皮细胞的启动因子,使原癌基因如畆激活莆0┗,以及抑癌基因女蚏失活,引起支气管和肺泡上皮的增殖异常,细胞增殖和凋亡平衡紊乱,最终导致细胞生长调节失控而形成肿瘤。细胞增殖异常是导致肺癌发生的重要原因,但其确切机制目前仍未完全阐明。因此,进一步发现肺癌细胞增殖的相关调控因子,将有助于阐明肺癌发生和发展的分子机制。又名.,,它在胚胎发育过程中的内皮细胞及内皮祖细胞中表达,是血管管腔发育过程中的关键因素,其表达降低可直接引起血管管腔的发育障碍【。取芯糠⑾諩在血管内皮细胞中的表达随着缺氧条件下诱导的血管生成紧接着很快上调,但这种增强的现象在更多的较成熟的肿瘤血管中并不持续存在,这表明其仅在血管生成的早期阶段发挥作用。另外,】等研究发现,谛矶嗳死嘀琢鲋械难9苣谄は赴诟弑泶铮包括肺腺癌、肾透明细胞癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、骨肉瘤、软骨肉瘤等,硕士学位论文
但在同一病人的非肿瘤组织中却几乎检测不到。因此,已有的研究表明,耘咛ズ椭琢鲎橹难9苌晒炭赡苡写俳饔茫ǘ杂诜伟细胞的增殖情况有何影响却未见明确报道。浅ざ任的单链、非编码核苷酸分子,具有高度的进化保守性,与其他蛋白质一起组成盏嫉某聊春咸琑。当蛋白复合体与靶基因的信使岷虾螅琑J记懈頼蚴亲瓒蟤姆耄佣引起靶的降解或者翻译抑制。它广泛参与动植物生长发育、细胞分化、增殖与凋亡、激素分泌及肿瘤形成等多种重要生物过程。生物信息学预测的结果显示每个梢缘骺爻汕俑霭谢颍庑﹎几乎对每一条遗传通路都具有潜在的影响,它们调控着不同的生物过程。槐浜鸵斐1达与各种人体肿瘤的发生、发展关系密切,勺魑0┗蚧蛞职┗蚨起作用。斡攵嘀种匾V琢鱿喙鼗如隝,与琺一与琺一与, ⒔褐柿觥⒁认侔⒎伟卵巢癌等发生和发展过程中起重要作用【】。已有研究显示包括在内的多种斡肓朔畏⒂头伟┑姆⒉」蹋∈蠛腿朔畏⒂⒂成熟逐渐增高。为进一步分析訣虮泶镉泻蔚鹘谧饔茫颐峭ü镄畔学软件和软件げ夥⑾,能与腨部分配对,从而影响其转录后的翻译过程。基于以上分析,本实验设想通过构建一种靶向于的过表达质粒并将其转染进入培养中的非小细胞肺癌细胞株细胞,经筛选建立稳定转染株,然后检测过表达对其靶基因表达的影响,通过平板克隆增殖实验、软琼脂克隆增殖实验、细胞计数法绘制中文摘要
生长曲线实验、流式细胞术等体外实验以及裸鼠肺癌体内移植模型的建立等体内实验来检测转染前后非小细胞肺癌细胞的增殖情况的改变情况。二、研究目的⒓。⑼ü⑼ü、实验方法⒐菇╩.泶镏柿#⒔浜涂罩柿7直鹱H局罙赴秆〗⒘阶槲榷ㄗH局辍⒘魇较赴跫觳饣蜃H拘省⒐庋晕⒕⒘魇较赴酢和实时荧光定量确椒ḿ觳庾H厩昂笕组细胞中捌鋗谋泶锴榭觥⑾赴剖笛椤⑾赴鲋呈笛包括平板克隆实验和软琼脂克隆实验等方法观察过表达质粒对于细胞体外增殖情况的影响。⒉捎昧魇较赴醵宰H厩昂笕橄赴邢赴芷诩觳猓治鋈橄赴之间细胞周期的差异。⑵は伦⑸渥H厩昂蟮娜橄赴⒙闶蠓伟┨迥谝浦材P停鄄旃达质粒对于转染前后细胞成瘤情况的影响,包括移植瘤生长曲线、瘤体体积和重量之间的比较。⒎直鹑∪橐浦擦鲎橹谱鞅城衅忻庖咦榛旧ǎ冉献H厩后三组不同移植瘤组织内泶锉浠榭觥⑼⒅馗次,重复性好。所硕士学位论文
选图表为沃馗词笛榈慕峁弧J菀云骄辣曜疾畋硎荆榧浔冉喜捎方差分析。以硎居型臣蒲б庖濉四、结果⒊晒⒘肆街晡榷ㄗH鞠赴辏ǹ罩柿WH局/组和过表达质粒转染株痬.。⒕魇较赴羌觳庀赴H拘史⑾%。⒐饩迪鹿鄄旆⑾郑珹赴階痬赴识啾咝危/细胞则呈梭形,即转染了过表达质粒的细胞相对于其他组细胞形状变得较狭长。⑹凳庇ü舛縋检测转染前后三组细胞内和量发现,相对于组细胞和/组细胞,/组细胞内和拷细摺⒉捎肳和流式细胞术检测转染前后三组细胞内鞍缀量发现,与组细胞和/组细胞任一组进行比较,/组细胞内烤细摺⒍耘嘌械娜橄赴捎孟赴剖ɑ嬷铺谙赴で撸峁示,相对于组细胞与