文档介绍：青岛大学
硕士学位论文
靶向VEGF的siRNA联合紫杉醇抑制胃癌细胞增殖的研究
姓名:尹延梅
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:于红
20090606
靶向的:献仙即家种莆赴┫≡镅导师于红教授关键词:;缮妫宦《荆晃钢琢觯蛔仙即目的探讨慢病毒载体介导的对人胃癌细胞9苣谄どひ蜃基因表达、细胞增殖、细胞凋亡及紫杉醇药物敏感性的影响。方法设计针对基因的押塑账嵝蛄校雙载体连接,构建重组载体,经庑蚣ê螅玴刈樵靥澹琾甇载体,共转染细胞,包装产生重组慢病毒颗粒甃并进行滴度测定。慢病毒甃H維细胞螅琑甈检表达,检测细胞培养液上清蛋白浓度,法检测及联合紫杉醇对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,染色及甐流式细胞术观察细胞的凋亡。结果重组慢病毒载体测序结果准确,病毒包装滴度为水平较空白对照组下未检测到..组细胞蛋白的表达,而对对紫杉醇的敏感性增加;流式细胞周期分析结果表明..转染后的细胞/期赴仓蛊诤虳合成前期壤撸琒期和/的细胞出现凋亡,而阴性对照组仅有サ南赴鱿值蛲觯籋旧ń果证实..组细胞核出现典型的凋亡形态学改变。的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,提高胃癌细胞对紫杉醇的敏感性。测赴鸙检测细胞蛋白表达,..转染赴后,其降了%;照组可检测到蛋白的表达;,—.
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论文作者魏夕互旖吼晁迫论文作者签名:尹互将日期:矽产钼石日导师签名:寸乏日期:谢月岁日学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明不保密本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成本人如违反上述声明,愿意承担由此引发的一切责任和后果。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品,知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为朐谝陨戏娇蚰诖颉旧鞯陌嫒ü榍嗟捍笱校未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用果。青岛大学。本学位论文属于:保密口,在年解密后适用于本声明。
基因的表达,表明以为抗血管形成的新型靶分子,已成为删治疗鱃茄9苣谄は赴引言胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,发病率居各类肿瘤的首位,每年因胃癌死亡的人数占全部恶性肿瘤死亡人数的四分之一。目前,胃癌的治疗主要包括:手术、化疗、生物治疗、中医中药等,但是胃癌根治后晟媛嗜匀唤系停乇鹗俏赴发生转移后,更加难以治愈。因此,寻求新的有效的治疗方法显得日益迫切。近年来,随着分子生物学技术的迅猛发展及对胃癌细胞生长、增殖、转移机制研究的不断深入,使人们认识到基因治疗有可能成为胃癌治疗的发展方向。血管内皮生长因子特异性有丝分裂原,是迄今鉴定出来的最重要的血管生成因子之一,有促血管形成和增加血管通透性的双重功能【。研究表明,胃癌的生长、浸润、转移、恶性程度及其预后均与肿瘤的血管生成密切相关。胃癌组织的表达明显高于癌旁组织,表达率明显高于高分化型胃癌;伴有血行转移者其的表达率明显高于无血行较深、较易发生转移、生存期较短、预后差籚故俏赴└巫R埔桓雒舾而独立的指标,在术中水平超过/的患者,术后预后差,通过单变量分析影响生存的因素中,蛋白对血管侵袭、淋巴结转移、腹膜内转移、淋巴管侵袭和治愈率关系密切,多变量分析显示只有水平与治愈率关系密切,肿瘤复发患者血浆水平明显升高S捎赩谖赴┑姆⑸⒎⒄辜白,赴墙改攴⒄蛊鹄吹囊项特异性抑制基因表达的新方法,其操作的简单性和对靶基因表达抑制的高效性使其成为基因功能研究的有力手段。近来研究报道,技术已用于抑制肿瘤生长因此该技术在肿瘤的基因治疗方面具有广阔的应用前景。国外已有文献报道,应用技术可特异地抑制乳腺癌、前列腺癌及大肠癌细胞基因的表达,国内亦有学者应用载体介导的捎行Ы档腿橄侔⒋蟪Π┘肮卑┫赴本实验应用技术,构建含特异性干扰序列的慢病毒重组质粒,将针对的片段,以慢病毒的形式转入胃癌细胞,观察对胃癌细胞表达及细胞增殖的作用,并联合具有广谱肿瘤杀伤性的化疗药物紫杉醇,观察后的胃癌细胞对紫杉醇的药物敏感性,以期为恶性肿瘤的基因治疗提供实验基础。与慢性胃炎、肠化及不典型增生组织相比较差异性更为显著;低分化型胃癌的转移者;与阴性的胃癌患者相比较,阳性者肿瘤体积较大、浸润程度移中的重要作用,提示可选择作为治疗靶点。缮妫殖芌