文档介绍：南昌大学医学院
硕士学位论文
家蚕蚕蛹过敏原蛋白质组学和分子生物学研究
姓名:刘硕
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:刘志刚
20100601
捅要家蚕是我国的重要经济昆虫,与此同时,家蚕又是一种重要的昆虫致敏原。家蚕蚕蛹在传统中医中作为一种药物被用来治疗高血压和脂肪肝,中国人有食蚕蛹的习惯,有关食用蚕蛹引发过敏的病例也时有报道,因此在中国,蚕蛹是一种重要的食物过敏原。本文旨在对家蚕蚕蛹的过敏原进行研究。也喜嫌脊粼腟兔庖哂〖7治觯菏紫壤贸倮胄姆ㄌ取家蚕蚕蛹的总蛋白,用%的狿缘鞍状痔嵋航蟹掷耄蠓直鹩菁也喜嫌脊舨∪说难G逵氲鞍捉蠭结合测试。结果发现:家蚕蚕蛹的蛋白有多条蛋白质条带,其中在浇条为主带。在与份患者血清的反应中,共检测到分子量近似为、、、、难粜缘鞍滋带。其中、、、Φ牡鞍滋醮胙G宓难粜苑从β蚀锏搅%。提示家蚕蚕蛹中确实存在着特定的过敏原蛋白。也喜嫌脊粼牡鞍字首檠а芯浚罕静糠质笛槟康氖峭ü虻缬尽ⅲ免疫印迹、质谱的方法对家蚕蚕蛹过敏原有更明确的研究。首先用双向电泳对家蚕蚕蛹蛋白进行分离,构建较为完整的家蚕蚕蛹蛋白双向电泳图谱:接着利用免疫印迹方法,使电转印到膜上的蛋白与阳性家蚕蚕蛹过敏患者混合血清进行反应,对于能够与过敏病人血清中岷系牡鞍捉兄势准āJ笛榻峁显示:家蚕蚕蛹蛋白在双向电泳中被成功分离,共得到龅鞍椎恪T诿庖印迹实验中,共有个蛋白点可以与家蚕蚕蛹过敏病人血清发生阳性反应,而在阴性对照中,未见其发生阳性反应;对这个阳性点进行质谱鉴定后,发现它们分别属于嗖煌牡鞍祝郝鸦圃鞍住家族蛋白、几丁质酶、丙糖磷酸盐异构酶、≈拭冈吮泶镌靥宓墓菇ā1静糠质笛槟康脑于构建家蚕蚕蛹几丁质酶原核表达载体。提取家蚕蚕蛹⒎醋B嫉玫絚利用设计好的锿ü齊玫郊付≈拭傅幕蚱危⒔溆朐靥连接,构建表达载体。结果显示:通过—玫降募付≈拭傅幕片段的核酸序列与数据库中的序列吻合,成功构建家蚕蚕蛹几丁质酶原核表达载体。为家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶的重组表达和免疫活性鉴定奠定了基础。摘要
体。进一步通过诱导得到热休克蛋白的重组蛋白,用缀筒阄鲋也喜嫌脊粼鞍兹刃菘说鞍的克隆、表达、纯化与免疫学活性鉴定:通过分子生物学的方法得到的重组过敏原蛋白,可以被应用于过敏诊断和免疫治疗。。提取家蚕蚕蛹⒎醋B嫉玫絚蒙杓坪玫腜引物通过—玫饺刃菘说鞍椎幕蚱危⒔溆朐靥錹连接,构建表达载分离,将得到的蛋白与家蚕蚕蛹过敏病人血清反应,以检测其免疫学活性。结果显示:通过得到的热休克蛋白的基因片段的核酸序列与数据库中的序列吻合;。通过本系列研究鉴定了家蚕蚕蛹总蛋白中的致敏组分,建立了其蛋白质组学双向电泳图谱及双向电泳免疫印迹图谱,成功地建立其过敏原几丁质酶原核表达载体,⒈泶铩⒋炕兔庖哐Ъǎ为家蚕蚕蛹的蛋白质组学、分子生物学的基础研究奠定了坚实的基础,同时为家蚕蚕蛹过敏性疾病的特异性诊断及治疗提供了理论依据。关键词:家蚕蚕蛹;过敏原;蛋白质组学;免疫学活性;重组蛋白摘要
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第录也瞎粲牍粼难芯家蚕生活周期各阶段、。属鳞翅目,蚕蛾科,学<也涎称鹪从谥泄显谖夜酚凭茫壳拔国仍然为养蚕大国。蚕是完全变态昆虫,一生经过卵、幼虫、蛹、成虫四个形态上和生理机能上完全不同的发育阶段。蚕丝是优良纺织纤维,家蚕的蚕蛹可食用,蚕蛾和蚕粪均有综合利用,是多种化工和医药工业的原料。然而在家蚕及蚕丝制品被广泛应用的同时,家蚕作为主要昆虫变应原,已被认为是引起变态反应疾病的重要致敏原⋯。因为蚕是完全变态的昆虫,家蚕在整个生活周期产生的物质,如蚕蛹、蚕尿、蚕蛾鳞屑等也可诱发过敏反应【T诖菩鄄隙杲慌涫保写罅康牧勖崖洌鳞毛及其碎片大量被人体吸入时,因其物理性刺激,%的人在反复接触后出现咳嗽,部分病人发展为哮喘。在日本,蚕蛾亦是引发过敏性鼻炎的重要因素蚕蛹由于营养价值较高,在传统中医中作为一种药物被用来治疗高血压和脂肪肝,同时,在我国,也成为人们佐膳之佳肴,是引起超敏反应最常见的食品之一A俅脖硐治M吩巍⑼吠础⒍裥摹⑴煌隆⒄鸩⒁馐墩习⑾屯采命的过敏反应蚕丝是一种很强的生物致敏原,蚕的广泛养殖,蚕丝制品的大量使用导致了蚕及蚕丝制品引发