文档介绍：广东医学院
硕士学位论文
乙肝病毒感染人胎肝细胞及苦参碱抗乙肝病毒的研究
姓名:林敏
申请学位级别:硕士
专业:病原微生物学
指导教师:陈群
20070301
第一部分:乙肝病毒感染人胎肝细胞的研究中文摘要目的:探讨乙肝病毒感染原代培养的人胚胎肝细胞的机制。方法:用无血清培养基培养人的胚胎肝细胞,然后添加乙肝病毒感染;用与实时荧光定量测定每天收集培养的上清液;荧光定量定细胞内含的乙肝病毒牧浚幻庖咦榛舛ㄅ嘌赴锏腍,肝细胞表型、⒆缘鞍、幻刻觳舛ㄅ嘌锨宓娜樗嵬亚饷醇觳庀赴さ耐暾浴结果:建立起稳定的肝细胞培养系统;乙肝病毒能感染培养的胚胎肝细胞并且在细胞罩复制;免疫组化能测到诟蜗赴斜泶铮籉测定感染后的天培养上清狣为阳性结果;舛ǜ腥竞一天培养上清的及Q粜越峁讨论:乙肝病毒能感染培养的胚胎肝细胞并且在细胞里复制;这种体外模式能为乙肝病毒感染肝细胞及在细胞中复制提供一个研究模型。
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刖舌的研究较少,且均为在体研究。但在体的研究受到诸多的限制,无法从细胞、分子虷在肝细胞内复制的情况。研究背景乙肝病毒腥臼且恢盅现赜跋烊死嘟】档娜蛐约膊。虼笤加亿人曾经感染过乙肝病毒,其中超过ト顺晌B愿腥菊摺磕昕傻贾万患者死亡,而且每年有万患者死于乙肝病毒感染导致的肝癌。N夜粲肝炎高发区,现患乙型肝炎为万。R蛭D壳吧忻挥芯煤鲜实腍感染动物模型,故腥净频难芯慷嗖捎肏体外感染实验。感染实验采用的材料、方法不尽相同,没有完善经典模式。所以需要建立一个完善的体外模型来研究乙肝病毒体内的感染机制,并且可以提供给抗乙肝病毒的体外筛选一个方便的工具。由于乙肝病毒的宿主范围狭窄和强烈的嗜肝细胞性,因此目前只有特定的几种细胞纾恕⒀肝细胞能够被乙肝病毒感染。早在年和年凇。炔捎米;虻姆椒ǔ晒Ω腥玖烁蜗赴琢鯤海等也成功的用野生乙肝病毒成功感染了鸭肝细胞嘲。逋飧腥肝细胞尤其是成人肝细胞培养系统的建立,国外也有报道,但其都是采用的感染源均是赴牟《究帕6且吧囊腋尾《尽啊啊9谕醴健⑼踝明,蒋业贵等用野生乙肝病毒感染人胎肝细胞,由于培养条件的限制,肝细胞很快的凋亡,乙肝病毒能够感染细胞,但病毒的分泌极短““Ⅲ。所以不是完善的研究模型和筛选抗病毒药物方便的工具。且目前上更深入地研究腥痉⑸幕啤N4耍颐翘教秩颂ジ蜗赴逋飧腥
法检测上清中虷、ḿ癝蚇〖羌觳庀赴中的粗浦屑涮逦6嗉玈蚇〖遣僮鞑街璺彼觯掖在同位素污染的问题,故在鉴定腥臼毖≡褚恢置舾小⑻匾烨壹虮阋仔械姆法是必要的⋯。⒘薍人胎肝细胞体外无血清培养系统。改善原代培养肝细胞的条件,更好地模拟体内肝脏生理环境,,并且复制,表达。.觳釮—琀、⒋恿康姆矫婊竦靡腋尾《靖腥靖蜗赴头泌的数据。从细胞、分子水平上更深入地研究腥痉⑸。.嘌蜗赴奶跫难芯俊Mü杓埔恢治扪G逄跫嘌疐:、尼克酰氨/,内皮生长因子痬上宋长因子/,ü砑蛹に亍⑾ü舛縋结合免疫组化能更好分析胞内外的病毒,从量的方面获得乙肝病毒感染肝细胞和分泌的数据。分析肝细胞感染病毒后、姆置谇榭觥既往报道的腥靖蜗赴奈南字屑℉是否感染成功的方法以胞内外的病毒,从量的方面获得乙肝病毒感染肝细胞和分泌的数据。研究目的继续增殖。研究内容生长的环境,目前已经使原代培养的肝细胞维持良好的分化和增殖功能。
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