文档介绍：中山大学
博士学位论文
日本血吸虫SjMLP/hsp70的克隆、重组表达及其功能研究
姓名:何思杰
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:吴忠道
20100605
重组表达及其功能研究日本血吸虫痟的克隆、中文摘要和日本血吸虫劬等,我国仅有日本血吸虫病流行。据指导教师:吴忠道教授中山大学中山医学院寄生虫学教研室阒专业:病原生物学博士生:何思杰中山大学博士学位论文◇血吸虫主要有曼氏血吸虫、埃及血吸虫防治血吸虫病的主要措施是采取人畜同步化疗及易感地带灭螺等相结合的综效作用与疫苗接种的长效免疫预防作用相结合不仅能有效减少疾病的总体发病日本血吸虫痟基因的克隆、重组表达及其功能研究血吸虫病怯扇颂逖N感染引起的一种人兽共患寄生虫病,主要流行于亚洲、非洲、拉丁美洲的个国家和地区。人体年全国疫情资料显示,我国尚有隽餍邢区蚵愿腥菊撸抑要分布在螺情难于控制的江湖洲滩地区,部分地区的疫情还有所回升趋势,或伴随出现向城市蔓延的趋势,因此,血吸虫病仍然是我国重点防治的感染性疾病之一。合性防治方法,但由于现有的以吡喹酮为主要治疗药物的化疗再感染率高,且耐药性不断严重化,使得血吸虫病的防治进展缓慢,急需在防治理论与关键技术方面有所突破。上世纪年代,随着分子生物技术的发展,血吸虫病疫苗研究重新获得了人们的重视,疫苗被认为是综合性防治措施的有效补充,即“药物化疗的短率,也能避免单纯化疗后的重复感染”。
研究目的及方法中山大学博士学位论文◇抗血吸虫病疫苗研究历经了死疫苗、减毒活疫苗、基因工程蛋白疫苗及核酸疫苗几个阶段。然而,近年来的实验研究已证明,这种单纯以刺激騎型体液免疫应答为主的特异性抗原分子并不能稳定地诱导动物模型高效的保护性免疫力,没有一个候选分子的保护性实验能获得高于%的保护力。致弱尾蚴疫苗的研究始于上世纪年代末,大量实验证明,经辐照致弱的侵袭性曼氏血吸虫或日本血吸虫尾蚴能诱导实验动物产生高达谋;ば悦庖吡Γ灾劣诘较衷究发现,这种保护性免疫力主要是由获得性免疫机制介导的,由陀攀葡赴为此,,比较捎谄涠捞氐纳镅Чδ芗懊庖哐匦裕艿饺嗣堑墓惴褐厥樱乇的稍,而有关其他两种血吸虫和难究较少。序列分析发现,血吸虫诼涎N婧腿毡狙N嬷涓叨缺J兀且与人类的分子的序列相似性高度%以上。因此,我们将血吸虫痟本研究旨在通过对日本血吸虫痟的克隆、重组表达及其功能研究,为进一步揭示该分子在紫外致弱尾蚴诱导高水平保护性免疫力的效应中可能起的研究方法主要是从原核和真核水平上,分别评价痟的生物学活性、仍是受公认的最高效、稳定的抗血吸虫病疫苗。对曼氏血吸虫致弱尾蚴疫苗的研免疫应答向陀攀铺逡好庖哂Υ鸱⒄沟某中悦庖哂Υ鸸獭分析紫外致弱尾蚴与正常尾蚴的可溶性虫体总蛋白,鉴定出个差异表达蛋白。据蛋白功能分类可大致分为啵直鹞O赴羌芟喙氐鞍住⒛芰看幌喙氐鞍住信号转导/调控相关蛋白、热休克家族相关蛋白及其他功能蛋白如鞍酌柑宓龋结果提示这些差异表达的蛋白质可能与致弱尾蚴诱导高水平免疫力有关,值得进一步研究。在这些差异表达的蛋白分子中,热休克蛋白家族是易濉T贕/中,至少存在盅N鍴蛋白序列,其序列长度分别为和蠬特异性功能域序列。至目前为止,有关血吸虫难芯浚饕J钦攵訦—。日本血吸虫痟基因的克隆、重组表达及其功能研究
研究结果毡狙N鎚猯痟纳镄畔⒀分析痟基因的克隆、表达及其鉴定中山大学博士学位论文◇抗原性及免疫保护性,并从真核水平上评价痟的佐剂效能。序列分析发现:哂蠨δ苡颍粲谌刃菘说鞍准易澹涠发现,痟具有信号肽,但没有明显的跨膜区;痟含有銮粒中,经⒚盖屑安庑蛉分じ媚康幕蚩寺〕晒Α8菸南妆ǖ溃琒/功能域,并克隆到中,经⒚盖屑安庑蛉分じ媚康幕蚩寺〕晒Α结果证实目的蛋白的编码基因能在成虫、正常血吸虫尾蚴、机械力断含/柿5乃拗骶璉盏螅苊飨蕴岣吒煤重组蛋白的在℃下的生存率,提示痟具有分子伴侣作用,而痟的两个功能域单独存在时,均不能改变宿主菌的热休克日本血吸虫甗痩虻目寺⒅刈楸泶锛捌涔δ苎芯级结构以宦菪V鳎煌ü鞣治鎏崾荆琒/墙媳冉媳J氐牡白,氨基酸序列上与曼氏血吸虫热休克蛋白序列的相似性最高,与大肠杆菌的氨基酸序列在进化上也是比较接近的。痟含有个潜在的酪蛋白激酶姿峄坏恪个潜在的蛋白激酶磷酸化位点、、銮痹诘奶腔点、隼野彼峒っ噶姿峄坏恪个潜在的亮氨酸拉链结构、銮痹诘孽;位点;通过治觯⑾諷/ㄎ辉谙吡L迳希煌ü齌げ在的赴砦患岸喔鯰细胞表位。根据蠥男蛄行畔该序列为痟的代表序设计引物扩增痟的ɑ竦玫哪康幕蚨ㄏ虿迦氲絧可分为核苷酸结合位点,及多肽结合位点,两个功能域,为此,分别设计引物扩增痟的两个尾后尾蚴及虫卵中均有转录。.玎
研究小结痟诱导小鼠保护性免疫的实验评价中山大学博士学位论文◇后