文档介绍：目录前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯疨蛄:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯乳腺癌的基因治疗研究凼⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
魁㈣痭,基因联合作用对增殖抑制和凋亡的研究摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶騌干扰表达载蚣癙虻ザ篮土:,为肿瘤联合基因治疗提供实验依据。方法:设计针对合成具有该靶序列短发夹结构的寡核苷酸,.=刈橹柿W;惺芴赴,经摇菌扩增,抽捉纯化质粒,通过酶切及测序鉴定确定重组质粒构建成功。同法构建不针对任何基因的阴性对照质粒。。乳腺癌细胞常规培养,于转染前一日接种于装澹陨狭街衷靥宓挠ü舛哉罩柿染后ü庀晕⒕迪鹿鄄炻躺ḿ昂焐ü庀赴嫉谋壤源判断转染效率。实验设置扇抛椤泶镒椤体,同时构建系鞯蛲龅骺匾蜃拇俦泶镌靥澹教基因的扇判蛄蠫用甈⒓ā0裵蚿一直鹩虴盖校琓一,.和一直鸬ザ馈⒘:献H救胂赴,,
疨:献椤⒏扇乓跣远哉兆,将以上构建的质粒分别转染各组细胞瞻鬃榧拥攘縋WH竞通过测各组细胞中蚉鞍椎南喽员泶锪浚涣魇较赴羌觳细胞的凋亡率和周期分布;法于转染后旒觳庀赴纳长抑制情况。结果:,重组质粒构建成功。H竞在荧光显微镜下观察,根据荧光细胞所占比例判断转染效率均达%左右。庖哂〖=:献橛肟瞻鬃橄啾萮蛋白的相对表达量下降了%;疨:献橛肟瞻鬃橄啾萈鞍椎南喽员泶量增加了%。、组和疨:献樵~内细胞生长缓慢、增殖显著抑制;疨:。魇较赴羌觳庀赴蛲龊拖赴芷诜植枷允荆鹤的细胞周期阻滞于/期,组的细胞周期基本无变化,结论:晒菇ㄕ攵詇基因的泶镌靥、、组和疨:献橄赴蛲雎分别为ァァィ琱组和疨:献疨:献楸萮组和组细胞周期阻滞更明显。
.迷靥蹇梢蕴匾煨缘匾种迫橄侔㎝.赴.,该载体可以在乳腺癌组织中增加蛋白量的表达量。、抑制细胞增殖,联蚉:鲜侵琢龌蛑瘟谱饔冒械愕挠幸嫜≡瘛关键词:颍籔颍涣:,细胞增殖抑制更明显,二者具有协同效应,
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乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,发病率占女性恶性肿瘤发病率的第一位。乳腺癌传统的治疗方法是以手术切除,辅以放疗、化疗及内分泌治疗。随着人类对恶性肿瘤发病机制认识的不断深入和分子生物学技术的飞速发展,基因治疗成为其生物学治疗的重要探索方端粒酶是一种逆转录酶,参与了端粒的维持,其高表达与细胞增殖、凋亡调控、永生化和肿瘤的形成等密切相关【人端粒酶逆转录酶端粒酶催化亚单位,是端粒酶活化的限速步骤。抑制虻表达,可下调端粒酶活性,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。墙昀幢ǖ馈新发现的蛋白家族中的促凋亡成员,有强大的促凋亡作用。研究表明趐依赖和非依赖途径的细胞凋亡启动与肿瘤发生过程中发挥着重要的作用,并促凋亡作用更强大、稳定,因此在近年肿瘤基因治疗的研究中受到广细胞凋亡是一个复杂的网络调节过程,端粒酶和都在肿瘤的发生和发展以及细胞凋亡过程中扮演着重要的角色,但在此过程中两者是否有协同作用还鲜有报道。有鉴于此,本研究选用投肆C秆粜愿弑泶镆约癙向。琱系鞯蛲龅骺匾蜃泛关注。日吾.·■一