文档介绍：第二军医大学
博士学位论文
基于阳离子聚合物/DNA纳米复合物微针给药系统的研究
姓名:尹东锋
申请学位级别:博士
专业:药剂学
指导教师:高申;丁雪鹰
20080401
导师签名::尹乐佯日期:刃歹年』月勿日日期:俨晗υ独创性声明学位论文版权使用授权声明日期:,、使用学位论文的规定,第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、。
摘要合成方法比较稳定、可靠,产率高,具有良好的可控性。.Ⅻ恹图谱中未见其它杂呙缡墙ê斜嗦肟乖虻恼婧吮泶镏柿V苯咏又痔迥冢谔迥诒泶锵应抗原,以刺激机体产生针对该抗原的免疫应答,产生保护性免疫。它是在基因治疗和转基因技术基础上产生的第三代疫苗,,主要是质粒掣煞壅耄∽⒏┖螅珼进入组织细胞,特别是到达树状突细胞瓤乖岢氏赴的转运效率较低,因而导致抗原表达水平低,免疫效果不好。目前关键是在于缺乏高效低毒的呙绲拇ǖ菹低场Fし籼乇鹗窃诨钚员砥げ阒写嬖谧糯罅康氖髯赐幌赴ɡ筛窈菏舷赴馐且恢指咝У抗原提呈细胞,可产生很强的免疫效应,因此活性表皮层被看作疫苗接种的最佳部位。然而呙缯庋那姿源蠓肿右┪锸俏薹ù┩钙し艚侵什愕钠琳希并且皮肤内的酶系会对呙绮到庾饔茫箍乖岢氏赴薹ú痘馜疫苗。为此我们设计了阳离子聚合物/呙绺春衔镂⒄敫┫低场N⒄是指通过微电子机械工艺技术制作的,尺寸在微米级,长度陨铣收胱吹母丛咏峁梗牧峡梢晕9琛⒕酆衔铩⒔鹗舻取N⒄朐谏镆窖Я微针给药系统可主动靶向于皮肤特定深度,即活性表皮层的郎格汉氏细胞。为了提高呙缭谔迥诘奈榷ㄐ裕铣闪嘶诰垡蚁┭前的基因载体,选用两亲性的嵌段共聚物垩跻蚁刍费醣椋垩跻蚁┣抖斯簿畚和聚乙二醇一羟基硬脂酸酯奘沃Я锤叻肿恿縋,不但可以增加疍复合物的稳定性,屏蔽复合物表面的正电荷,减小其对细胞的毒性作用,还因为和分子中含有疏水基团,对细胞具有一定的亲和力,不会显著降低呙缣迥谕庾染效率。以乙肝呙缥DP鸵┪铮疾炝搜衾胱泳酆衔铮疍疫苗复合物微针透皮给药后的小鼠体内免疫效果。第一部分使用琥珀酰亚胺酯法活化非离子表面活性剂或哪┒唆基,得到活化率高,反应活度大的产物。使用活化后的聚合物按不同比例对修饰。经过葡聚糖凝胶纯化,超滤脱盐,冷冻干燥,成功的合成了一系列不同修饰度扛鯬分子上分别接枝觥个、觥龊鯬騍腉聚合物。结果显示,本方法合成的阳离子聚合物接枝率高,控制投药量能定量地对行奘危浣又β视敕从κ蓖兑┝康哪Χ瘸柿己玫南咝怨叵担得鞲质峰,证明这些阳离子聚合物的纯度较高。基于阳离子聚合物/擅赘春衔镂⒄敫┫低车难芯域有广泛的应用。微针用于药物传输系统具有精确、无痛、高效、便利的优势。利用
范围内。随着复合籼值的增加,粒径有减小的趋势。高分子量的修饰物,第二部分重点考察了阳离子接枝聚合物/春衔锏南喙匦灾省D旱缬咀柚分析结果显示,完全阻滞璧腘/邓孀臥修饰度的增加而增大,随着修饰物分子量的减小而减小。本实验所制备的疍、疍复合物粒径在在高修饰度时复合物的粒径明显增大。复合物的电位随疨值的增加而增加;相同疨值的复合物,其电位随表面活性剂接枝数的增加而减少;复合物的电位在相同修饰度且相同疨值时,随表面活性剂分子量的减小而略有增加。ú舛细胞毒性的结果表明,使用表面活性剂修饰梢圆煌潭鹊亟档推湎赴拘裕低浓度时每个又σ桓霰砻婊钚约恋姆肿蛹纯上灾档拖赴拘浴T诟吲ǘ仁泵个又Α个表面活性剂分子则可显著降低细胞毒性。第三部分评价了阳离子接枝聚合物/春衔锾迥谕庾H拘ЧQ∮昧肆街址别编码绿色荧光蛋白和虫荧光素酶的质粒。为了获得虫荧光素酶在体内较高的表达,将舳涌寺〉匠嬗ü馑孛副泶镏柿中,,低分子量的蚐修饰的诘托奘味仁辈换嵯著地降低转染效果,低修饰度的淖罴炎H拘Ч胛葱奘蔚腜相似。随着表面活性剂分子量增大,接枝率增加,其最佳转染效率随之下降。笪簿猜鲎⑸复合物,测定各个脏器中虫荧光素酶的表达,除了肺部外,⒄耄疾炝宋⒄氲幕登慷龋果表明该微针阵列可以容易地穿破铝箔和离体皮肤,并具有一定的坚韧度,不易折断。考察了微针对不同药物的体外透皮促进作用。首