文档介绍：四川农业大学
硕士学位论文
APP菌毛亚单位apfA基因克隆、原核表达及免疫原性研究
姓名:蒋鸿光
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:郭万柱;王印
20080601
中文摘要关键词:籥豢寺。辉吮泶铮幻庖咴将猪传染性胸膜肺炎血清偷腟瓵株从基因的信号肽去除后,应用根据ǖ赖闹泶拘孕啬し窝籽G錶型的蛐蛄锹胶牛篈设计并合成引物,以细菌崛∈,用椒ɡ┰龀龀ざ任的目的基因片段。将该基因克隆甌载体上,经序列测定,结果表明获得了猪传染性胸膜肺炎血清偷腟瓵株的克隆。该基因包含猪传染性胸膜肺炎血清偷腟狝株印趴基因的全长为黾罨目7旁亩量颍嗦个氨基酸组成的功能蛋白。序列分析表明:该基因与鲜章嫉闹泶拘孕啬し窝籽G型、际趵┰龀霰嗦隺猿墒斓鞍椎幕颍⒔ǜ贸墒斓鞍谆蛑刈榈皆吮达载体。经酶切、ǎ砻魉菇ǖ闹刈橹柿N狝的印俄基因原核表达质粒。将重组质粒转入表达菌赴粜跃渖秆甈治鲆约癢分析表明,成功构建了挠∨康拇蟪Ω菌基因工程菌株。用作为诱导剂对基因工程菌株进行诱导。结果显示,在分子量约为τ忻飨缘玫鞍字时泶锾醮朐て诘娜诤螦执成熟蛋白大小一致。表达的蛋白质主要以不溶性包涵体形式存在,“资螅璄检测发现,随免疫次数的增加抗体滴度逐渐升高;。,
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纫纠年乡勰弘甓嘈暮侥辏伦〦论文独创性声明关于论文使用授权的声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:意。研究生签名:阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业
最早分离于年【。本病病原最早称为胸膜肺炎嗜血杆菌∞绷印而线杆菌属,称为胸膜肺炎放线杆菌似鯠赾朵羛概仰以删聊伽缸珹”。第一章文献综述≡弟一早义陬琢尬猪传染性胸膜肺炎琍怯尚啬し窝追线杆菌,弓鸬囊恢种砀叨却拘院粑兰病【。该病仁状伪ǖ酪岳矗聊壳耙驯椴际澜绺鞯兀页手鹉增长趋势。我国于年首次报道本病的临床病例,近年来发病率也日益增高。煞⑸诟鞲瞿炅浣锥蔚闹恚始毙曰蚵愿腥尽H绻谝桓龃游锤腥竟膜肺炎放线杆菌的猪群引入该菌,则会引起急性爆发,致死率可高达ィ果是一个慢性感染的猪群,则死亡率变化较大,但却表现为很高的发病率,一旦猪只感染此病,则表现为生长迟滞、饲料利用率低、日增重明显下降等。该病在许多国家内广泛存在,给全世界的养猪业造成了很大的经济损失,为国际上公认的危害现代养猪业的蠹膊≈弧L乇鸬兀捎诓煌G逍途曛浣换ッ庖性不强以及一旦发病抗生素极难治疗,给本病的临床控制带来了很大困难。杨旭夫等首次发现了ǖ拇嬖冢ǖ鞍拙哂泻芮康目乖裕梢源碳机体产生相应的抗体。据此,人们提出可用菌毛制成疫苗以预防某些传染病。为目前有几种不同的疫苗应用于控制胸膜肺炎放线杆菌的感染。使用灭活苗进行免疫可以提供对特定血清型的保护作用,然而却无法提供对不同血清型的保护作用。使用包含、虯萊毒素的亚单位疫苗则在保护性上有所改进,可以诱导动物产生交叉保护,但是作为兽用疫苗,亚单位苗显然由于成本太高而不实用。基因缺失弱毒苗也尚处于研究之中。菌毛的发现则为胸膜肺炎疫苗的研制提供了一些新思路。本文就牟≡А⒘餍胁⊙А⒘俅舱锒嫌敕治及新疫苗的研究等方面的进展进行综述。猪传染性胸膜肺炎病原为胸膜肺炎放线杆菌,于年首次报道,—R蛴肓质戏畔吒司腄同源性很高,于年列入放届四川农业大学硕士学位论文
⑸镅卣胸膜肺炎放线杆菌,属于巴氏杆菌科⒎畔吒司羲芻素,最近研究发现该菌还有鞭毛。芊⒔推咸烟恰⒄崽恰⒐呛吐笱刻牵酸不产气,有些菌株可发酵乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖,触酶、尿素酶试验本菌生长温度范围为钍饰露任,..W罴选3醮畏离时供给ィ可促进生长发育,营养要求比较高,在普通琼脂平板、普边缘整齐,干燥无粘性,呈苎#谇煽肆η碇桨瓹,ぞ浔壬鲜鲜血琼脂平板菌落稍大,形态相同,含马血清的营养肉汤,驶胱巧は象,无菌膜形成。巧克力血琼脂平板上生长菌体比鲜血平板上菌体稍大,随着传代次数增加菌体变得瘦小,形态不