文档介绍：布鲁氏菌部分外膜蛋白基因的克隆、表达及免疫原性研究课题来源答辩委员会成员论文评阅人第一军医大学级硕士学位论文业称指导教免疫学陈瑶李明教授余新炳教授朱家勇教授吴忠道教授符林春教授高基明教授董文其教授朱振宇教授马骊教授猵专师琫名年日广州
布鲁氏菌部分免疫原性蛋白的克隆表达和免疫原性研究硕士研究生:陈瑶指导老师:李明教授摘要。石,≯。布鲁氏菌是革兰氏阴性的兼性细胞内寄生菌,可以引发世界范围内人和牲畜及野生哺乳动物的感染,也是生物武器研究的热点。布鲁氏菌引发的传染性疾病和巨大的经济损失已经引起全世界的关注。补体结合实验,玫瑰花环实验,血清凝集实验和酶联免疫吸附实验等经典血清学诊断均依赖布鲁氏菌脂多糖作为抗原检测相应抗体,主要存在以下的缺陷:⒉悸呈暇嗵怯肫渌母锢际弦跣韵妇闹嗵谴嬖诮徊娣从Γ诩测过程中可能出现假阳性的结果;荒芨菅G逖Ъ煅榧鹛烊桓腥竞徒又过疫苗。因此寻找蛋白抗原成为解决布鲁氏菌的诊断中存在的这些缺陷的主要方向。目前减毒活菌疫苗是预防布鲁氏菌的主要手段,但是由于减毒活疫苗可能存在毒力回复以及隐性感染等危险,一直未能应用于人类的布鲁氏菌预防。而且和其他细胞内寄生细菌一样,布鲁氏菌的哂薪系偷拿庖咴裕荒芤发足够清除病原的免疫反应,是布鲁氏菌能够在宿主细胞内存活并繁殖的一个重要原因,因此寻找蛋白性质的抗原具有重要的意义。国外的研究工作已经对一些布鲁氏菌的外膜蛋白进行了免疫原性和保护性的研究,期待能够应用于布鲁氏菌诊断和亚单位疫苗的制备。其中、蚥G棵庖咴缘鞍撞⒕哂斜J氐腄序列。尤其是在硕士论文一
一些疫苗株中的弱化和缺失对于鉴别天然感染和疫苗接种具有现实意义。,分别命名为珿和。并通过産笛榧觳馄涿庖咛匦裕峁允救值鞍拙芄槐徊悸呈暇腥兔血清特异性识别,而载体蛋白与阳性血清并不能产生反应,证明这三种蛋白具有良好的抗原特异性,可期待应用于布鲁氏菌的诊断。根据这三种蛋白不同的理化特性,我们采用了不同的纯化方式进行了蛋白的纯化,其中虶竦昧肆己玫拇炕Ч鳲在纯化的过程中未能够保持稳定,发生了降解。纯化后的虶鞍追秩危谝淮问褂猛耆ǜナ献艏粒后两次采取不完全弗氏佐剂作为佐剂免疫小鼠。两种蛋白均能诱导高滴度的体液免疫。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子分析和、和馨细胞亚群分析,结果显示庖咝∈笃⑾赴璆刺激之后可以产生径皇荌,提示盏嫉氖荰型免疫反应。并且能够诱导特异性细胞毒反应,导致提呈抗原的巨噬细胞的溶解凋亡。此外,小鼠体内和淋巴细胞记数的减少提示,庖哂盏夹∈淋巴细胞产生猋从而诱导产生赴奶匾煨韵赴咀饔谩=峁显示,盏嫉拿庖咧饕S蒀馨拖赴鳦馨拖赴淖饔因此而收到了限制。相对于此挡唤瞿芄挥盏糡型免疫反应,产生干扰素和特异性细胞毒细胞,也能够诱导兔庖叻从Γ鶬和虎颉淋巴细胞增殖实验和、和馨拖赴侨悍治鼋峁允荆琓型和兔庖叻从Φ南嗷マ卓棺饔檬笹喽杂贕来说能够维持更长时期的免疫保护作用。和其他细胞内寄生菌一样,激活的巨噬细胞对于宿主清除感染病原来说是布鲁氏茵外膜蛋白的克隆、表达和免疫原性分析
非常重要的。猘能够激活巨噬细胞和促进炎症反应,酶联免疫吸附测定细胞因子结果显示,盏糡—哪芰τ邢蓿鳪诿疫的全过程中维持一个较高的猟水平。结果显示虽然不能产生和谎苛业南赴庖叻从和细胞毒作用,但是它能够同时激活秃蚑型免疫反应从而提供更长效的保护性作用。因此,外膜蛋白蚥际侵票覆悸呈暇呙绲暮蜓成分。硕士论文关键词:布鲁氏菌;外膜蛋白;疫苗;诊断;表达;免疫应答Ⅱ
琫:篖駌硕士论文瓵琣甌,——..甀,——,.猺,
.甒,琌琱籰布鲁氏茵外膜蛋白的克隆、表达和免疫原性分析珿.,.,甀—猙瓵—,,琩甌’.
—.—硕士论文猧—,、一琣瑂:猅—,,,、甌—瓵虎騱.—一..
查量垒堕盐壁墨鱼竺垒竺:查兰塑墨壅昼竺坌堑一——:;.—,籨;籭
前言布鲁氏菌病,简称布病上是由布鲁氏菌属,简称布氏菌的细菌侵入机体,引起变态反应性的人兽共患的传染病。人主要通过皮肤黏膜、消化道和呼吸道感染,其临床表现为长期发热、伴有多汗、关节痛及肝脾肿大等。该病不仅损害人群健康,还影响着包括乳、肉及其制品、皮、毛、医药等在内的民生需求,严重时可对我国畜牧业和旅游事业发展乃至国际贸易造成影响一、布鲁氏菌的流行状况据世界统计资料表明,全球每年因布病造成的经济损失近亿美元,我国单就新疆、青海两省区概算,每年由于布病造成的直接损失约谠H嗣癖摇I鲜纪年代中期后,布病疫情在世界部分地区范围内回升,尤以亚洲更为明显”除台湾、江苏和贵州等省区外,我国其余各省区的人群都有不同程度的疫情。年上半年报告布鲁氏菌病发病例,接近年全年发病人数,疫情形势非常严峻。为有效控制布病疫情,卫生部、农业部近日联合下发通知要求加