文档介绍：XI. Observation on cytoskeleton
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A、dye by Coomassie blue
【Purpose】
掌握用考马斯亮蓝（Coomassie blue） R250染色法观察植物细胞骨架的方法。
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【Principle】
细胞骨架(Cytoskeleton) 组成：主要包括微管、微丝和中间纤维以及核骨架-核纤层体系。微管主要分布在核周围，呈放射状向四周扩散，微丝主要分布于细胞质膜的内侧，而中间纤维则分布在整个细胞中。
细胞骨架作用：具有维持细胞形态结构和内部结构的有序性、参与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递和细胞分裂等重要功能。
细胞骨架的研究方法：考马斯亮兰R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫荧光法等。
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考马斯亮兰R250染色法的原理：考马斯亮蓝R250可以对各种蛋白质进行染色。细胞骨架有一个特性，即用非离子去垢剂（如Triton X-100）处理时，可以保持非溶解状态。当用这类试剂处理细胞时，细胞内其它可溶性的物质和膜成分都被抽提出来，只留下细胞骨架。考马斯亮蓝R250虽不能对微丝进行特异性染色，但当其它蛋白成分被抽提后，就能清晰地显示微丝束的形态。
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[Apparatus, material and reagent]
光学显微镜；烧杯、吸管、镊子、玻片染色缸、载玻片、盖玻片；
新鲜洋葱鳞茎;
6mM磷酸盐缓冲液（）、M缓冲液、1%Triton X-100、%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛。
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[experiment protocol]
1、撕取洋葱鳞茎内表皮(约1平方厘米)置于2~3ml 磷酸缓冲液中待其下沉(烧杯1) ；
2、用2~3ml 1%Triton X-100处理20 min(烧杯1) ；
3、吸去Triton X-100，用M缓冲液2~3ml洗2次，每次5 min (烧杯1) ；
4、 2~3ml 3%戊二醛固定40 min(烧杯2) ；
5、~3ml洗2次，每次5 min，滤纸吸去残液(烧杯1) ；
6、 2~3ml %考马斯亮蓝R250染色15分钟，然后用蒸馏水小心冲洗1～2次(烧杯1) ；
7、将表皮铺放在载玻片上，加盖玻片，在高倍显微镜或者油镜下进行观察。
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cytoskeleton
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Cytoskeleton of onion cell
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B、 dye by Rhodamine-Phalloidin
【purpose】
熟悉细胞骨架固定染色的方法，掌握用荧光标记的鬼笔环肽显示微丝的原理和方法。
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