文档介绍：课题来源:自选课题专名神经外科学学位申请人导答辩委员会主席答辩委员会成员月广州釉质上皮型颅咽管瘤实验模型建立及对釉质上皮型颅咽管瘤细胞体外迁移特性的影响称指教师论文评阅人业南方医科大学级博士学位论文
釉质上皮型颅咽管瘤实验模型建立及杂质上皮型颅咽管瘤细胞体外迁移特:影响博士研究生:周杰指导教师:漆松涛教授潘军副教授摘要颅咽管瘤,且恢盅芈使苈肪渡さ穆谏掀だ丛的轴外肿瘤,多位于鞍区或鞍旁区域,是颅内最常见的先天性肿瘤之一。颅咽管瘤约占所有儿童颅内肿瘤发病率的ィ乇鹗窃诎扒琢鲋姓ヒ陨稀年,奥地利神经病理学家状谓使芰鲎魑R焕嗟ザ来嬖诘陌扒瘤进行了详细的描述,嗄旯チ耍谕夤愦笱д叨月使芰鼋辛斯惴憾深入的研究,但限于该肿瘤研究平台的缺乏和技术条件的制约,目前对于其肿瘤起源、病理特征、肿瘤生物学特性等方面的认识仍有很大争议。颅咽管瘤属于良性肿瘤,国际卫生组织,肿瘤病理分类为叮醋橹翁煞治S灾噬掀ば珹土圩慈橥沸礁鲅切汀O嘟嫌诤笳撸灾噬掀ば吐使芰龀P纬芍缸赐黄鹎窒芪宰织,术中全切肿瘤困难,术后易复发,临床预后也差于后者。国外多个单中心大宗随访结果也提示釉质上皮型颅咽管瘤患者预后较鳞状乳头型差,但具体机制尚不清楚。多年来,由于缺乏稳定的体外及体内模型,国内外学者主要在组织学层面对釉质上皮型颅咽管瘤进行了大量研究,但相关基础研究进展缓慢;少数学者对釉质上皮型颅咽管瘤细胞进行了体外培养并应用于功能实验,但文中均未对肿瘤细胞特性进行相关描述,体内移植瘤模型也少有报道。我们有必要对釉质上皮型颅咽管瘤实验模型进一步探索,为深入了解该肿瘤生物学特性和发生发展规律提供新的研究手博士学位论文
段。我课题组前期研究中发现:颅咽管瘤,特别是釉质上皮型颅咽管瘤与周边正常神经组织常形成炎症粘连,导致术中难以全切肿瘤,术后肿瘤易复发,炎症程度与患者预后明显相关;自发的颅咽管瘤囊性结构破裂和术中囊液渗漏常可导致无菌性脑膜炎的发生;组织学检查发现釉质上皮型颅咽管瘤细胞周围常形成密实的胶质增生带和大量炎症细胞侵润。这些现象说明颅咽管瘤细胞或肿瘤间质细胞可能通过产生大量炎症细胞因子调节肿瘤炎症的发生发展,影响患者预后。曾报道白细胞介素,在颅咽管瘤中异常表达,可能是导致颅咽管瘤炎症的重要炎性介质,影响患者预后;但限于缺乏可靠的实验手段,作者并未继续在体外或体内进行相关功能实验深入研究,其具体作用机制尚不清楚。且恢种匾5亩喙δ芟赴蜃樱斡氲鹘谠煅!⒚庖哂胙字⒎从Γ胂赴凋亡、增殖、损伤修复等密切相关,也参与调节中枢神经和心血管系统的重要生理功能。同时,诖蟪Π⑷橄侔┑榷嘀稚掀ば灾琢鲆约澳越褐柿龅戎惺嗌窬瘤中均有高表达,且与肿瘤预后密切相关。梢酝ü琢鱿赴白苑置凇被蛑瘤微环境中间质细胞“旁分泌”等途径,与相应受体结合形成复合体导致异常信号通路的激活,进而促进肿瘤发生、肿瘤新生血管形成,肿瘤迁移侵袭能力提高。然而,谟灾噬掀ば吐使芰鲋械木咛遄饔蒙胁磺宄S纱耍颐羌偕瑁河灾噬皮型颅咽管瘤细胞及其微环境中间质成分是否也能通过“自分泌”或“旁分泌”的方式分泌偈怪琢鱿赴匦苑⑸谋洌佣跋旎颊咴ず因此,基于釉质上皮型颅咽管瘤基础研究的需要以及诟弥琢鲋锌赡艽嬖的重要生物学作用,本研究采用原代培养的方法建立人釉质上皮型颅咽管瘤有限细胞系,明确其生物学性状;采用裸小鼠皮下种植细胞悬液的方法探讨釉质上皮型颅咽管瘤体内模型建立的可能性;同时,采用抗体芯片技术检测不同炎症分级肿瘤组织中炎症细胞因子的表达,外源性碳び灾噬掀ば吐使芰鱿赴魅稩对肿瘤细胞生物学特性的作用,并对其相关作用机制进行初步分析,旨在阐述炎症与颅咽管瘤问的相互关系,为临床治疗颅咽管瘤提供新的思路。摘要Ⅱ
.:采用胰酶消化法建立釉质上皮型颅咽管瘤有限细胞系,并通过滤膜分次第一章第二节人釉质上皮型颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型的初步建立第一章第一节釉质上皮型颅咽管瘤细胞模型的建立与检测目的:探讨有效的釉质上皮型颅咽管瘤细胞原代培养方法,检测体外培养的肿瘤细胞自身生物学特性。过滤法纯化细胞;倒置显微镜、染色观察生长情况及细胞形态,免疫细胞化学方法鉴定肿瘤农型,噻唑蓝比色法绘制细胞生长曲线,并用流式细胞技术分析肿瘤细胞周期。结果:ù饰%。人釉质上皮型颅咽管瘤细胞在含血清培养基中呈贴壁生长,肿瘤细胞常成小团状生长,体积大,胞浆丰富,可见少量气泡状结构,细胞呈不规则多边形“上皮样”形态,胞核成圆形,体积较大。免疫细胞化学鉴定甤谟灾噬掀ば吐使芰鱿赴诒达,证实其上皮性来源。肿瘤细胞体外增殖缓慢,但第天细胞增殖率均有差异倍体细胞出现,,.ィ翰糠执τ贕甅期,ィ簧俨糠执τ赟期,..%。结论:采用有血清贴壁培养法可以建立釉质上皮型颅咽管瘤有限细胞系模型。通过滤膜分次过滤等特殊处理方法,可有效地对釉质上