文档介绍：泰山医学院
硕士学位论文
含报告基因的凋亡素基因真核表达载体构建研究
姓名:王福庆
申请学位级别:硕士
专业:外科学
指导教师:王庆宝
20080501
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论文作者签名:超导师签名:诹荔关于学位论文使用授权的声明原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:本人完全了解泰山医学院有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权泰山医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文和汇编本学位论文。C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑’,
含报告基因的凋亡素基因真核表达载体构建研究中文摘要展,细胞生长、分化、凋亡的机制逐渐被认识,一种新的治疗方法一基因治疗正在成为素基因片段一致。凋亡素基因真核表达载体测序鉴定结果表明,本研究合成的凋亡素基研究生:王福庆专业:外科学普通外科导师:王庆宝教授研究背景:近年来,恶性肿瘤对人类的威胁日趋严重。传统的肿瘤治疗方法存在其局限性。人们正积极研究新的肿瘤治疗方法,以期获得更好的疗效。随着分子生物学研究的飞速发研究热点。其中,凋亡素基因能够特异地诱导肿瘤细胞凋亡,在肿瘤治疗上的前景尤为突出。凋亡素能选择性地诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡,而并不杀伤人和鼠的正常二倍体细胞。因此,被认为是第一个真正意义上的选择性诱导肿瘤细胞凋亡、而不损伤正常细胞的凋亡基因。经过研究凋亡素能够诱导人成骨肉瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、鳞状细胞癌细胞、宫颈癌细胞等多种肿瘤细胞凋亡。凋亡素基因表达载体的构建是凋亡素分子生物学特点研究及其在肿瘤基因治疗方面应用的基础,如何成功构建具有较高转染率和更利于结果观察的凋亡素基因表达载体尤为重要。研究目的:构建含报告基因的凋亡素基因真核表达载体。/研究方法:对质粒进行虰双酶切,回收含凋亡素基因完整序列巍6栽銮啃吐逃ü,回收载体大片段。将凋亡素基因通过连接反应,连接到增强型绿荧光蛋白基因┒说闹罩姑苈肭埃⑹沽秸读框不移位,构建成甐质粒。并对其进行酶切分析和测序鉴定载体结构。研究结果:通过对构建对的柿C盖小⒌缬荆鱿至的电泳条带,与凋亡因与斜ǜ娴牡蛲鏊鼗蛐蛄幸恢拢葱晕%。
研究结论:将凋亡素基因连接于增强型绿荧光蛋白的┒耍晒菇说蛲鏊亍T銮啃吐逃光蛋白表达载体猇。关键词:凋亡素基因:增强型绿色荧光蛋白;真核表达载体;构建
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机制逐渐被认识,一种新的治疗方法—基因治疗正成为研究的热点。由于环境污染加重,不良生活习惯及精神压力增加,恶性肿瘤对人类的威胁显得日益突出,肿瘤已经成为目前人类常见死亡原因之一。全世界每年约有嗤蛉嘶级裥肿瘤,恶性肿瘤为男性第二主要死因,女性第三主要死因。我国每年约有新病例颍死亡嗤蛉恕V琢鑫2皇芑蹇刂贫さ男律铮律镆坏┬纬珊螅灰虿∫消除而停止生长。恶性肿瘤生长迅速,易发生转移,早期机体无明显症状难以早期发现,给治疗带来了困难。目前恶性肿瘤的治疗主要包括:手术治疗、化学疗法、放射疗法、中医中药治疗等。但是手术治疗只能切除肉眼所见的肿块本身及所在器官的部分或全部,以及周围可能发生转移的正常组织及区域淋巴结,而不可能完全清除机体所有的肿瘤细胞。化学疗法虽然能够很大程度上清除机体内残存的肿瘤细胞,但化疗药物只能杀灭一定百分比的肿瘤细胞,残存的肿瘤细胞仍可出现临床复发。并且化疗药物对正常细胞有一定的杀伤作用,尤其是对生长增值的正常细胞,所以用药后可出现各种严重不良反应。放射疗法同样存在严重的副反应。那么有没有一种能够特异性杀灭肿瘤细胞的抗肿瘤药物呢壳叭嗣在这方面做了大量的研究。随着分子生物学研究的飞速发展,细胞生长、分化、凋亡的据研究,肿瘤的发生是由于细胞增殖分化与细胞凋亡之间的平衡遭到破坏。细胞过度增殖,超过细胞凋亡,或者细胞凋亡的速率下降,而细胞增殖的速率相对上升,两种情况均可导致肿瘤的发生。在调节细胞凋亡与增殖的平衡中,基因蚥起着关键作用,它们通过激活或抑制半胱氨酸蛋白酶家族系家族鹘谙赴牡蛲与增殖。现在已知且恢种琢鲆种埔蜃樱墒笵受损伤的细胞停留在冢利晕倚薷矗绻芩鹣赴鸇不能修复,蚪舳赴蛲龌疲せ上游