文档介绍：微生物的培养方法
微生物培养就是提供一个适宜特定微生物生长的理化环境,使其大量地繁殖。微生物培养的目的各有不同,有些是以大量增殖微生物菌体为目标(如单细胞蛋白或胞内产物),有些则是希望在微生物生长的同时,实现目标代谢产物的大量积累。由于培养目标的不同,在培养方法上也就存在许多差别。让所需的微生物大量繁殖,并进而产生大量目标代谢产物的过程称为微生物发酵,这尤其是指工业上大规模的微生物培养。“培养”和“发酵”两个概念经常是通用的,但它们与生物氧化中的“发酵”概念是截然不同的。
从历史发展的角度来看,微生物培养技术的发展主要有以下特点:
(1)从少量培养发展到大规模培养。
(2)从浅盘培养发展到厚层固体或深层(液体)培养。
(3)从以固体培养为主发展到以液体培养为主。
(4)从静止式液体培养发展到通气搅拌式液体培养。
(5)从分批培养发展到连续培养以至多级连续培养。
(6)从游离的微生物细胞培养发展到利用固定化细胞培养。
(7)从单一微生物培养发展到混合微生物培养。
(8)从利用野生菌种发展到利用变异菌株以及“工程菌”。
总之,微生物培养的形式丰富多样,各具特色,各有所长。根据微生物种类、培养目的和要求、规模和资金投入的不同可以有不同形式的培养装置。良好的装置应在提供丰富而均匀的营养物质的基础上,保证微生物获得适宜的温度和对绝大多数微生物所必需的良好通气条件(除少数厌氧菌外),此外,还要为微生物提供一个适宜的物理化学条件和严密的防止杂菌污染的措施。以下是一些实验室和工厂中常见的微生物培养方法:
(solid-state culture)
固体培养就是利用固体培养基进行微生物的繁殖。微生物贴附在营养基质表面生长,所以,又可称为表面培养(surface culture)。固体培养在微生物鉴定、计数、纯化和保藏等方面发挥着重要作用。一些丝状真菌也可进行生产规模的固体发酵。
实验室常见的固体培养
实验室主要有试管斜面、培养皿平板、较大型的克氏扁瓶和茄子瓶斜面等固体培养方法用于菌种的分离、纯化、保藏和生产种子的制备。用接种针挑取原始培养物后,在固体培养基表面划线接种,(1,2,3) 。也可以用涂布棒将少量的液体培养物涂布在整个固体培养基表面,或将少量液体培养物与融化后降温至50~60℃的固体培养基混匀,倒入培养皿中,浇注成平板。接种后的培养物直接放入培养箱中恒温培养。这些方法适用于好氧和兼性好氧微生物的培养。
斜面接种和穿刺接种培养方法
斜面接种:;;3. 用接种针蘸取菌样后,移到斜面上划线;穿刺接种:(头部无环)垂直插入固体培养基内,再原路拔出
对微好氧微生物采取穿刺培养则更适宜于它们生长,(4)。玻管中加入固体培养基,灭菌后穿刺接种,然后塞上橡皮塞。越靠近培养基深处越缺氧,生长的菌厌氧程度越高。
对厌氧菌培养必需创造更严格的无氧环境。一种方法是在斜面接种后,将培养管棉塞上部截去或用火点着烧掉,用玻璃棒将管内部分的棉花压至离培养基1cm处,棉塞上方再压入一含水的脱脂棉,加入1:1比例混合的焦性没食子酸和碳酸钠粉末,立即加上橡胶塞。焦性没食子酸和碳酸钠在有水的情况下,缓慢作用,吸收氧气,放出CO2,造成无氧环境,。也可将厌氧微生物固体培养物放在真空干燥器内,用泵排出其中的空气,并可进一步向其中充入氮气或95%氮气和5%二氧化碳的混合气体,再放置一定的温度环境中培养。

(a) (b)
. 平板划线培养方法
平板划线的过程:;2. 在平板固体培养基表面划线;(b) 平板划线培养结果:在划线的起点,菌落相互重叠,在划线的末端,逐渐出现单菌落

中的厌氧试管的剖面图
针对厌氧微生物有人采用一些专用的培养装置,如:
(1)Hungate滚管技术主要原理是利用除氧铜柱来制备高纯氮,并用高纯氮驱除小环境中的空气,使培养基的配制、分装、灭菌和储存,以及菌种的接种、培养、观察、分离、移种和保藏等过程始终处于高度无氧的条件下,从而保证了厌氧菌的存活。用这种方法制备的培养基称为预还原无氧灭菌培养基。将菌接种到融化的培养基中,然后将特制的试管()用丁基橡胶塞严密塞住后平放,置冰浴中均匀滚动,使含菌的培养基布满在试管的内表面,犹如好氧菌在培养基平板表面一样,最后长出许多单菌落。
(2)厌氧培养皿用于厌氧培养的培养皿有几种设计:有的利用皿盖创造了一个狭窄的空间,加上含有还原剂的培养基,达到无氧的培养目