文档介绍：东北师范大学
博士学位论文
化学修饰肝素抑制P-选择素介导的乳腺癌细胞粘附作用分子机
制的研究
姓名:米东辉
申请学位级别:博士
专业:细胞生物学
指导教师:曾宪录
20091201
摘要瓾撕瓾、瓾和/狧Q∪×巳巳橄侔┫选择素是细胞粘附分子的一个家族,其主要功能是在炎症发生,免疫应答和组织损伤修复过程中介导白细胞与血管内皮细胞,以及介导白细胞之间、白细胞与血小板之间的粘附。近年来,有大量的证据表明,选择素在肿瘤转移的过程中介导经血液转移的肿瘤细胞与血小板及血管内皮细胞的粘附。在此过程中,肿瘤细胞与血小板及血管内皮细胞间的相互作用是肿瘤成功转移的一个非常关键的环节。众所周知,肿瘤转移是一个多步骤、多阶段、多因子参与的复杂过程,多种细胞粘附分子发挥着重要作用,如选择素分子和整合素分子等。对于整个转移进程而言,与其它粘附分子相比,选择素在肿瘤黏附的起始阶段起着关键的作用。在选择素家族中,选择素在介导多种肿瘤细胞与血小板,肿瘤细胞与内皮细胞间的粘附起了非常重要的作用。因此,干扰谎≡袼睾推渑涮宓南嗷プ饔迷谝欢ǔ潭壬峡梢韵魅踔琢鱿赴淖R颇力,所以抑制肿瘤细胞与≡袼氐慕岷鲜侵琢鲎R浦瘟浦械囊桓銮痹诎械恪谎≡袼赝ü肫湎嘤Φ呐涮褰岷希⒒铀淖饔谩>湍壳八#负跛械难择素的高亲和性的配体都具有特定的糖链结构,包括路易斯寡糖.,硫酸乙酰肝素琀,硫酸软骨素以及硫酸化的糖蛋白或糖脂。人们针对谎≡袼氐南喙嘏涮澹杓屏税ǹ固濉⑴涮宓睦嗨莆锖湍D馕镌谀诘腜一选择素拮抗剂,其中肝素类分子在体外和体内的研究中都证明能够抑制谎≡袼厮榈嫉亩嘀肿瘤细胞的粘附。但其分子机理还不清楚,许多问题有待于进一步阐述。肝素是一种糖胺聚糖,是临床上广泛应用的抗凝血药物,其抗凝血活性带来的潜在出血并发症危险限制了其在预防和治疗肿瘤转移方面的应用。为此,人们利用化学修饰方法,制备了多种具有低抗凝血活性的肝素修饰物,这些肝素修饰物不但具有抗肿瘤增殖和转移的作用,而且其抗凝血不良反应小。尽管目前肝素修饰物抑制肿瘤转移的机制不十分清楚,但是从临床和动物实验中所得的结果来看,具有低抗凝血活性的肝素修物在预防和治疗肿瘤转移方面还是一类很有潜力的治疗试剂。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,并且发病率每年约以サ乃俣鹊菰觯窒转移是影响乳腺癌预后最重要的因素。已有的研究表明,谎≡袼啬芄挥肴巳橄侔┫胞结合,但具有低抗凝血活性的化学修饰肝素是否能够抑制谎≡袼赜肴巳橄侔┫赴的相互作用及人乳腺癌细胞表达的谎≡袼氐呐涮謇嘈陀写徊降姆治觥本研究中,我们利用化学修饰方法,制备了四种具有低抗凝血活性的肝素修饰物胞..,系统地分析了这种肿瘤细胞系与≡袼亍⒆。结果表明,人乳腺癌细胞..能够与≡袼卦诰仓购筒懔魈跫陆岷希嗡匾..畇
及化学肝素修饰物可以显著的抑制瘤细胞与≡袼亍⒆。为了进一步分析化学修饰肝素抑制人乳腺癌细胞与≡袼叵嗷プ饔的机制,我们通过特异性的单克隆抗体标记、肝素酶处理肿瘤细胞和流式细胞仪分析,证明人乳腺癌细胞..高表达硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,但是肝素酶处理不影响选择素与人乳腺癌细胞..的结合,说明这种人乳腺癌细胞..表面的选择素配体不具有类硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结构。≡袼嘏涮謇嘈停猛僖核崦负鸵鹊鞍酌复硎笛椋っ魅巳橄癌细胞..表达的≡袼嘏涮謇嘈椭饕J欠峭僖核峄堑鞍住Mü赴诜肿硫酸化抑制实验,证明细胞膜蛋白分子硫酸根的含量影响谎≡袼赜肴巳橄侔┫赴..的相互作用。鉴于本实验中所制备的肝素修饰物与肝素对照相比,有不同程度的去硫酸化修饰。肝素修饰物硫酸化的程度与其抑制≡袼赜肴巳橄侔┫赴鸝的结合呈正相关。关于化学修饰肝素在抑制≡袼亟榈嫉娜巳橄侔┳R浦惺欠裼懈泛的应用,有待进一步的研究。我们的实验结果表明,本研究中所制备的四种肝素修饰物狧、.瓾和/瓾芄灰种芇一选择素所介导的人乳腺癌细胞与选择素的的粘附,而且≡袼嘏涮宀痪哂欣嗔蛩嵋阴8嗡氐鞍拙厶堑慕峁埂N颐堑难究为肝素修饰物应用于抑制乳腺癌转移的治疗提供了很好的靶点,同时也为进一步解析≡袼赜肫渑涮逑嗤咦饔玫幕铺峁┝诵碌南咚鳌关键词:细胞粘附;选择素;化学修饰肝素;肿瘤转移;乳腺癌
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学位论文作者签名:缛掌冢骸5└字筥工作单位:——重缝学位论文作者签名:粒监指导教师签名:期:巡兰独创性声明学位论文版权使用授权书期:垃鸟,縡口日本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了