文档介绍：新疆农业大学
硕士学位论文
犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原性
研究
姓名:申卫红
申请学位级别:硕士
专业:基础兽医学
指导教师:简子健
2010-06
犬瘟热病毒 N 蛋白基因的克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原
性研究
摘要
犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染犬或其它食肉目动物
引起的高传染性、致死性疾病,以双相热、红疹、结膜炎、白细胞减少及中枢神经系统
损害为主要特征,为危害特种养殖业发展的一类重要疾病。因该病没有特效药物进行治
疗,所以对本病的预防和早期诊断就尤为重要。本研究主要包括以下三部分:
1 犬瘟热 N 蛋白基因的克隆及序列分析
参考 GenBank 中发表的 CDV N 蛋白基因序列,用软件设计一对特异性引
物, 从患犬瘟热的犬全血样品中提取总 RNA,经 RT-PCR 扩增得到 1 572bp 的基因片
段,将其插入 pMD18-T 克隆载体中构建了 pMD18-CDV N 重组质粒,并将其转入到大
肠杆菌 DH5α中,进行鉴定、测序。序列分析表明克隆的 CDV N 蛋白基因从起始密码
子 ATG 开始到终止密码子 TAA 结束全长为 1 572 个核苷酸,与 GenBank 中发表的 CDV
N 蛋白基因序列相比同源率达到 %-%。
2 犬瘟热 N 蛋白基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究
将 CDV N 蛋白基因与原核表达载体 pGEX-4T-2 连接构建了 pGEX-4T-2-CDV N 重
组质粒,将其转化到大肠杆菌 BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、IPTG 诱导表达。Western
blot 分析显示表达产物为 84kDa 的重组蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的反
应原性。
3 犬瘟热 N 蛋白基因原核表达条件的优化、重组蛋白纯化及免疫原性研究
为了提高 GST-CDV N 重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性的表达量,对 GST-CDV N
重组蛋白在大肠杆菌中的多种表达条件进行了研究,选择最佳条件进行高效表达,用
GST-Sepharose 4B 亲和层析柱对 GST-CDV N 重组蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性
重组蛋白。通过免疫小鼠证明了 GST-CDV N 重组蛋白具有良好的免疫原性。
本研究成功克隆、表达了犬瘟热 N 蛋白基因,纯化得到了具有很强抗原性的重组蛋
白,为建立犬瘟热 ELISA 诊断试剂盒提供了可能,为亚单位疫苗的研制提供了依据。
基础
关键词:犬瘟热病毒;N 蛋白基因;克隆;原核表达;抗原性

III
Cloning and Prokaryotic Expression of N Protein Gene of Canine
Distemper Virus and Antigenicity of the binant Protein
Abstract
Canine distemper is a kind of infectious and fatal disease which affected on the development of
special strain cultivation industry, caused by canine distemper virus infecting canine and other carnivora
animal. The clinical features are diphasic fever, roseola, conjunctivitis, leucocytopenia, and central nervous
system damage. It is particularly important to prevent and early diagnose, because now it doesn’t have
specific medicine to cure. The following three studies were conducted in the present article.
1 Cloning and sequence analysis of N protein gene of canine distemper virus
One pair of the special primers were designed by software according to the N protein