文档介绍：中国农业大学
博士学位论文
富硒灵芝中水溶性硒蛋白的纯化表征及其生物活性研究
姓名:杜明
申请学位级别:博士
专业:农产品加工及贮藏工程
指导教师:胡小松;赵广华
20060601
捅要关键词:,纯化,性质表征,生物活性本论文以富硒灵芝子实体为原料,比较了四种蛋白提取物堋⒀稳堋⒋既堋⒓钊的氨基酸组成、蛋白质分布、糖含量、硒含量及自由基清除活性的差异。结果表明:水溶性、盐溶性和碱溶性粗蛋白的氨基酸整体分布不存在差异,而醇溶性粗蛋白同其它三者间存在较大差异。水溶性粗蛋白具有最高的硒含量、最多的蛋白种类及最为宽泛的分子量范围、最强的自由基清除活性,碱溶性蛋白则具有最少的糖含量。自由基清除活性从低到高的顺序为:醇溶稳碱溶堋每种粗蛋白对自由基的清除率与蛋白浓度之间的关系可用对数方程表示,它们的硒含量趋势与抗氧化性趋势间具有较好的一致性,蛋白分布和氨基酸组成等也是影响抗氧化性的重要因素,并且它们之问不存在抗氧化协同作用,因此选定富硒灵芝水溶性硒蛋白作为进一步研究的对象。以蛋白质结合的硒量和自由基清除活性为指标,依次采用硫酸铵沉淀、离子交换树脂层析、分子排阻层析等方法对目标蛋白进行纯化。结果表明:选择%作为沉淀蛋白质的硫酸铵饱和度,得到粗蛋白的硒含量是/炕饰ィ痪齉强阴离子交换树脂初步纯化的蛋白的硒含量是/,⑾允境鲆欢ǖ目寡趸钚浴N鞍椎目氧化活性随着蛋白质结台的硒量增加而增强,显示了富硒灵芝硒蛋白在发挥抗氧化作用过程中硒与蛋白间的协同作用。对该蛋白质的结构进行初步表征的结果表明:—是一种硒蛋白,,.,分子量是,,等电点是畂呛课%,硒含量是/。..且恢中碌鞍字剩粲贒鞍准易逯的一员。,,逋饪寡趸钚浴⒚·统踝杂苫清除活性,清除率与浯嬖诩亮恳览倒叵担硐为对数回归关系;在相同的蛋白浓度下,甈的一·清除率高于对·的清除活性。纯化得到的..目寡趸钚栽几哂谖淳炕拇值鞍倍。..牡椭懈呒亮孔榫哂幸定的促淋巴细胞增殖活性,对小鼠细胞杀伤活性也具有很大促进作用。然而,甈却不能刺激小鼠巨噬细胞产生产生更多的免疫因子畁。样品免疫调节活性由弱到强的顺序为:—·拿庖咴强活性比粗蛋白提高约倍。..哂幸欢ǖ奶逋饪怪琢龌钚裕¨痬ǘ认拢有抑制税籽2∠┫,%、.%平¨从本文的结果可以看出,寓硒灵芝硒蛋白具有较高的生物学活性,所以寓硒灵芝蛋白可作为一种新的高生物活性成分进一步深入研究平推τ谩中国农业大学博士学位论文中文摘要%。
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缩略词表缩写英文全称中文全称牛血清白虽白毛细管等电聚焦电泳刀豆素顺磁共振自旋捕集技术普通灵芝粗蛋白氢化物原子荧光法次黄嘌呤电感偶合等离子体发射光谱法脂多糖基质辅助激光解析电离飞行时间质谱【一粂一【一一·猼琲】天然杀伤细胞聚丙烯酰胺凝胶电泳肽质量指纹图谱聚偏二氟乙烯十二烷基磺酸钠硒硒代半胱氨酸硒代蛋氨酸猅————!狹中国农业大学博士学位论文狝.
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