文档介绍：第十章 高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC)
§10－1 概述
一、高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点，因此得到迅猛的发展。目前已成为应用极为广泛的化学分离分析重要手段。
1．高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较
高速：在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达 103cm·min-1. 例如分离氨基酸，用经典色谱法，柱长约170cm，，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成；
高效：其柱效可达3万塔板/米以上（气相色谱约2000
塔板/米），分离效率大大提高了。
2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
（l）气相色谱法分析对象只限于气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析；
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它与组分不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用，因此，可选用不同极性的液体，选择余地大，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便；
（3）气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作；
高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。
二、 影响液相色谱分离的因素
气相色谱所讨论的基本概念及基本理论，如：保留
值，分配系数，分配比，分离度，塔板理论，速率理
论等与液相色谱一致，但液相色谱流动相为液体，其
扩散系数，粘度，密度等与气体均有很大的差别，都
将对色谱分析过程产生影响。
该式与气液色谱速率方程的形式基本一致，主要区别在液液色谱中纵向扩散项可忽略不计，影响柱效的主要因素是传质阻力项。
1、液液色谱的Van Deemter方程式：
2、液相色谱传质阻力：
（2）流动相传质阻力项
（3）流动相滞留传质阻力项
（1）固定相传质阻力项
三、提高液相色谱分离效率的措施
1、采用小而均匀的填料（担体），减小dp,
2、减小填料孔穴深度，且孔径大；
3、用低粘度溶剂作流动相；
4、适当降低流动相流速；
5、适当提高柱温；
6、减小柱前柱后死体积。
§10－2 高效液相色谱法的类型 及其分离原理
液液分配色谱 （LLPC）
化学键合相色谱(CBPC)
液固吸附色谱(LSAC)
离子交换色谱(IEC)
离子对色谱(IPC)
离子色谱(IC)
尺寸排阻色谱(SEC)
(凝胶色谱法 Gel C)
亲和色谱(AC)
高
效
液
相
色
谱
法
类
型
一、液液分配色谱法（LLPC）
及化学键合相色谱(CBPC)
1．分离原理
分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。与气液色谱一样，固定液是涂渍在担体表面；与气液色谱的不同之处在于，液相色谱的流动相种类对分配系数有较大的影响。
2、正相分配色谱和反相分配色谱
为了避免固定液的流失。要求流动相尽可能不与固定相互溶，而且两相的极性差别越显著越好。根据所用流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱；
正相分配色谱：流动相的极性小于固定相的极性。它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是按极性顺序流出（先小后大）；
反相分配色谱：流动相的极性大于固定相的极性。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。