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感染舭小鼠体活化特点,系统研究了甤在夏氏疟原虫感染中调控应答效应机制研究实验目的·中文论著摘要·疟疾是疟原虫通过媒介昆虫蚊传播的人类最为严重的寄生原虫感染性疾病。年奔脖ǜ嫦允荆奔擦餍杏诜侵蕖⒀侵藓屠∶乐薜鹊个国家,全球约亿人口受到疟疾威胁。每年有大约亿疟疾病例发生,近百万人死于疟疾感染。疟疾已成为全球最严重的三大公共卫生问题之一。因此,有效疟疾疫苗和抗疟新药的研制开发已经成为当今世界迫切需要解决的重点课题,而疟原虫感染宿主机体应答的免疫学、分子生物学等综合基础研究是其重要前提。在体内建立适时、适度的保护性免疫应答有赖于免疫调节机制的精确调控。大量研究表明,调节性赴,谒拗髅庖叩骺赝缰蟹挥举足轻重的作用。在鼠疟或流行区个体均已经发现疟疾感染会引起数量变化。疟疾流行区研究发现,流行区个体对疟疾感染的高抵抗性源于功能性缺失。恶性疟患者体内的活化与疟原虫高水平增殖密切相关。同时,间日疟原虫感染中数量增高与原虫负荷增加有关。但同时有研究证实不能对疟疾急性期感染发挥调控作用。榷喔鲅芯啃∽橹な礣芄桓ㄖ嫣避宿主免疫监视,可能是宿主对原虫发生免疫耐受的主要原因。但近期有研究显示,消除将导致宿主贫血、原虫负荷增加和病理性炎症应答等不良症状出现。因此,在疟疾感染中的作用尚待深入研究。我们前期的研究显示,致死型约氏疟原虫感染中,/∈蟮囊赘行杂胩逵矹的活化密切相关。鼠在和致死型夏氏疟原虫腥中呈现截然相反的感染结局。为深入探讨在疟疾感染中的作用地位,本研究动态观察了感染中对庖哂Υ鸬牡骺匦в捌湎喙鼗疲云诮徊矫魅在疟疾感染过程中的作用地位。,畒,’
周龄、雌性舭小鼠,经腹腔分别感染能小鼠于感染前、感染后和,经腹腔给予抗/鼠/腹水。与实验组对应同一时间点,对照组胞小鼠经腹腔给予同体积的罰。方法检测经培养⑾赴锨逯蠳健<扑闫浜州实验方法⑹笛槎锛捌淠P凸菇⑻迥贑赴⑵⑾赴ü饪固迦旧和Γ甉定量检测郊觳细胞凋亡水平检测寄生的红细胞,构建不同的实验动物模型。、、鼠脾脏,常规制备脾细胞悬液。取脾细胞悬液,预先加/綢/封闭抗体封闭I枰跣远哉管及对应单标管。℃,孵育。再加入抗一瓵邪谌旧ǎ。跤。用疨重悬细胞,待流式细胞仪进行检测。为染色胞内表达水平,每份样品同时用抗..。,孵育。再加入抗..或抗邪谌旧ǎ。跤。用疨重悬细胞,待流式细胞仪进行检测。采用椒ǎ直鸺觳饩嘌脾细胞上清甕和甉分泌水平。酶标仪测定怠=峁允约梁刑峁┑/—
实验结果⑼臣蒲Х治感染小鼠矿赴感染小鼠原虫血症水平和生存率~∈蟾骨唤又×常规收集脾细胞,调细胞浓度个/管。设阴性对照管和单标管。。再加入..,待流式细胞仪进行检测。’较分析组内和组间均值的差异。∮。寄生的红细胞后,于感染后在外周血中可见疟原虫感染的红细胞,随后红细胞感染率迅速上升。%升至%。%小鼠于感染峰值后全部死亡。。并且,原虫血症达峰值%奔溲映僦粮腥竞骴。随后,红细胞感染率陡然下降,在感染后ソ抵%,在感染后痹姹怀沟浊宄小鼠生存期明显延长。与痌笙啾龋诟腥竞骴珼/。为此,我们以蟊泶颋荧光强度为标准,表达荧光强度高于陨险呤游狥嫩。与/鼠相比,在感染后.,。消除鼠感染后表达一过性短暂下调,随后出现明显回升。在感染后,消除组脾脏赴俜趾坑攵哉兆槲⒒疨,
因子水平。与笙啾龋珼靶∈蟾腥臼甤与¨小鼠相比,∈‘细胞总数是对照组的%,随着对照组’‘。相比,消除组泶锼矫飨越档颓椅纸铣な奔洹S攵哉兆相比,消除组从感染后,泶镉薪档颓魇啤T诟腥竞骴明显下降,于感染后現表达回升至对照组水平。在感染后,消除组脾脏总数的增加,消除组瓼赴计浔壤徊浇档汀T诙哉组‘细胞总数达峰值时,消除组‘细胞总数是对照组的%。为明确对兔庖哂Υ鸬挠跋欤颐羌觳馄⑾赴嘌锨逯星把字⑾⑾赴因子甕和甉明显增加,且巨噬细胞活化特征性标志水平亦明显增加。与对照组相比,消除组于感染后甕、甉和的分泌水平进一步增强。为确定是否调控由赴榈嫉奶逡好庖哂Υ穑颐羌觳饬赴