文档介绍：多酚氧化酶的研究简介多酚氧化酶( polyphenol oxidase , 简称 PPO )、品质等密切相关,人们很早就开始对它进行深入细致的研究. ?铜是酶的活性中心,从蛋白质中除去一部分或全部铜,将引起酶活性下降或完全失活,若添加铜的话, 酶活又能恢复。不同果蔬中的 PPO 铜辅基的数量会有所不同,如蘑菇中 PPO 含4个铜原子,而扁豆的 PPO 含1 个铜原子。?现在 PPO 的应用多用于提高植物对病原菌的抗性。? PPO 与一些水果和作物的褐化有关。 PPO 是决定红茶品质的关键酶类。在啤酒生产过中,PPO 与啤酒风味陈化紧密相关。反之,为了防止水果褐化,保持水果新鲜,生产上也运用多种方法降低水果中 PPO 活性和含量。提取和纯化制备***粉( 4℃) - 30 ℃的果实解冻与***-蒸馏水混合粉碎抽滤滤渣用-30 ℃的***冲洗滤渣既为***粉室温下晾干。?活性酶的提取用磷酸缓冲液将***粉溶解离心沉淀再用磷酸缓冲液提取1次合并 2次离心后上清液浓缩粗酶?(NH4)2SO4 分级沉淀(NH4)2SO4 按质量浓度进行 9个分级加入粗酶液中 0℃下静置离心上清液再加入下一级的(NH4)2SO4 浓度(重复操作,测定每次沉淀的酶活性和蛋白含量) PPO 的纯化常采用盐析法。盐析主要是利用酶蛋白在高浓度的盐溶液中溶解度减小而析出的原理。硫酸按由于价廉、溶解度大,且能使蛋白质稳定,故是最常用的盐析剂。?多酚氧化酶的 SDS-PAGE 电泳纯度鉴定、分子量测定常用 SDS-PAGE 电泳对多酚氧化酶的纯度和分子量进行测定,并推测同工酶的数量。?葡聚糖凝胶文献报道植物组织中 PPO 分子量一般介于 40-70K 之间,根据葡聚糖凝胶分离大分子的原理,葡聚糖凝胶分离 PPO 与杂蛋白。不同型号凝胶的分离范围是根据球形蛋白理论模型确定的,而实际分离蛋白的结构与理论模型常有较大差异,因此在纯化 PPO 时,采用不同型号的葡聚糖凝胶进行分离效果的比较。