文档介绍：基因芯片的制作
基因芯片技术流程
制备方法及点样仪器
探针的制备:标记方法
杂交:杂交液、杂交温度、
洗涤条件的选择
扫描仪:激光
CCD
分析软件的开发
基因芯片的制备
杂交
检测
数据分析
芯片的制备
原位合成
高密度(可达40万点/)
<25bp
ONA
测序分析,寻找点突变(Hyseq专利保护)
微量点样(针点、喷墨〕
较高密度(可达10万点/)
500~5000bp
DNA、抗体抗原、受体药物等
对比分析
数据分析、寻找差异表达的基因
靶基因
Cy3标记A组织
Cy5标记B组织
混合探针
以两种波长的激光扫描
杂交
A
B
杂交实验条件
探针的制备
标记方法
PCR
逆转录
随机引物
缺口翻译
标记物
同位素
荧光染料
化学发光
杂交
杂交体积(使核酸浓度增加
10万倍)
玻片: 2-200l
滤膜:5-50ml
杂交液和杂交液的组份
杂交温度、时间
洗涤条件
洗涤液的组成
洗涤的温度、时间
(探针A + 探针 B) 混合探针
95 ℃变性
95 ℃变性
42 ℃ 15hrs
杂交
洗片试剂1、2、3
洗涤
543nm扫描
633nm扫描
检测
扫描仪
激光共聚焦扫描
光源:特定波长的光
激发面积:<100平方微米
如:ScanArray 3000
CCD 成像术
光源:连续波长的光(如弧光灯)
激发面积:同时激发多个1平方厘米的面积
Detector
Confocal pinhole
Filter
Laser beam
Substrate
Objective lens
Detector lens
激光共聚焦扫描仪的扫描原理