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中文摘要中国药典收录的三个水蛭品种中,宽体金线蛭璮,所口刀肠憧腑目诘使用最广泛,并且在我国广泛养殖,另外两个品种:日本医蛭、柳叶金水蛭始载于《神农本草经》,历代本草均有记述。中医认为水蛭具有破血、逐瘀、通经之功能。近年来,它的医用研究越来越广泛,特别是水蛭中提取的抗凝物质,目前研究最多的是水蛭素。线蛭在我国养殖数量很少,现在药厂使用的多数是宽体金线蛭。而关于宽体金线蛭活性成分国内报道研究的很少,关于宽体金线蛭中抗凝物质的序列更是没有报道。为了进一步探讨其抗凝作用的物质,本试验采用宽体金线蛭作为实验材料,对其含有的抗凝物质进行分离纯化并进行序列测定。首先采用宽体金线蛭的鲜品与干品作为实验材料,。结果表明:采用干品宽体金线蛭作为粗提材料,,,三氯乙酸法作为实验方法相比,每克材料所得到粗品质量与比活力均比后者要高;当用鲜品作为实验材料时,无论采用哪种方法,所得粗品质量及比活均小于以干品作为实验材料的质量及比活。因此本试验采用干品宽体金线蛭作为实验材料,。为分离得到单一蛋白质并对提取方法进行优化,本试验采用不同柱填料进行分离。采用弊芑盍厥章适%,%,纯化倍数。在总活力回收率与吸收峰相近情况下,炕妒8哂赟虼宋颐遣捎魑D汗瞬阄鲋盍稀6阅汗瞬阄龅玫降目鼓镏式欣子交换分离并且对不同柱填料进行比较,结果表明:..分离后电泳结果显示只有两个蛋白质条带,.有三条蛋白条带,因此采用....相比,.回..ィ..宽体会线蛭抗凝物质分离纯化及理化性质研究
交换层析的柱填料。将阴离子交换得到的抗凝物质进行掷耄甈缬窘峁允荆挥械ヒ惶醮得鞣掷氲玫降目鼓镏适堑缬敬康单一肽链,,初步推算其等电点。最后将所得的抗凝物质转膜,诵蛄测定。根据等电点、分子量及测序结果分析,我们提取得到的抗凝物质是一种新最终对分离得到的抗凝物质进行理化性质分析,结果表明分离纯化得到的抗凝物质是一种非常稳定的蛋白质。温度升高℃水浴蚿的改变不影响其活力。在某些变性剂%./ト宜存在条件下也非常稳定。%的℃加热才使活力部分丧失。只有和温度同时升高其活力才开始下降,、℃条件下处理即可使其活力基本丧失。本实验为宽体金线蛭进一步临床应用提供了一定的科学依据:对宽体金线蛭入药机理研究提供了理论基础;首次报道宽体金线蛭中抗凝物质的序列,为以后进一步研究打下了基础。关键词:宽体金线蛭;抗凝物质:分离纯化;稳定性分析作者:马洪利指导教师:许维岸的蛋白质中文摘要宽体金线蛭抗凝物质分离纯化及理化性质研究
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目录前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·紊植肌⒎掷唷⑿翁约跋靶浴窝芯坷芬约耙┯眉壑怠位С煞帧!⒖鼓⑾巳芟低澈涂鼓痢我├碜饔