文档介绍：湖南师范大学
硕士学位论文
沉默Vsx1基因后金鱼胚胎的蛋白质组差异表达研究
姓名:喻小燕
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:谢锦云;梁宋平
20070501
下游确实存在着多种转录因子,脚侑可能是通过这些转录因子摘要以往研究通过差异显示技术和差异蛋白质组学技术发现转录因子在金鱼单倍体胚胎中不表达,而在二倍体中表达,基因是调节前脑和眼睛发育的重要基因,分析基因是与金鱼眼睛空间模式形成相关的调控基因和二倍体依赖型机制的侯选目标基因。为进一步了解在金鱼胚胎发育中和二倍体依赖型基因表达比较蛋白质组学方法来研究沉默引起的蛋白质组的变化,从而探究在金鱼胚胎发育过程中的功能及其调控方式。本文以注射了反义寡核苷酸州的胚胎为实验组,以注射呐咛ノ6哉兆椋鄄熳⑸浜笫笛樽楹投哉兆榈姆⒂榭觯发现在原肠早期,⒂⒁让赶仍蚨劳觯砻鰽质点的分离,获得了重复性较好的凝胶图谱,采用软件分别对差异蛋白质进行比较分析,经质谱鉴定了个蛋白质鸦频白除外渲龅鞍字手辉谧⑸淞薃—的实验组中有表达,个蛋白质在实验组中表达上调,龅鞍字手辉诙哉兆橹杏斜泶铮能分析,发现了一些与细胞分化、神经发育、眼睛发育、信号转导、发育调控相关的差异蛋白质。这些蛋白质都可能直接或间接地受到的调控。如一表达或表达上调,与文献报道的是鲎B家种谱酉喾砻来间接调控各功能基因的表达的。关键词:,显微注射,反义寡核苷酸,蛋白质组,金鱼胚胎调控机制中的作用,采用反义寡核苷酸技术抑制的表达,再用作用导致表达受阻,致使胚胎在原肠期发育停滞。对实验组和对照组的胚胎全蛋白质采用双向凝胶电泳进行蛋白个蛋白质在对照组中表达上调。通过对这些鉴定的差异蛋白质点的功戎辉谑笛樽橹
,甀、,,.,琣籩琕瑆掺鷅砸瓾琣瓵,,.’.,..
篤琈珹甅一琫,∞瓵瑆.,,.,
缩写表杏⑽亩哉蛩岚∏杌一羟基肉桂酸胆酰胺丙基二乙胺】一丙磺酸羲⋯⋯⋯⋯⋯双向电泳蛩仗谴⋯⋯乙二胺四乙酸庖阴0滔鄍荻⋯⋯⋯⋯⋯液相质谱す獠痘裎⒘壳懈基质辅助激光解吸飞行时间质谱闹柿恐肝仆译撞嫠ū0贰綨’一QG灏椎鞍⋯⋯⋯电喷雾质谱⋯⋯⋯⋯⋯同源异型框蛋白质抢胱尤ス讣⋯⋯⋯聚丙烯酰胺凝胶电泳⋯⋯⋯⋯蛋白酶抑制剂/
⋯⋯⋯⋯聚偏二氟乙烯榛蛩崮腔炝蚯杷岜锦募谆叶琋,,—宜⋯⋯⋯⋯三羟基甲基氨基甲烷】甌/矢ㄖす饨馕尚惺奔浯V势猅⋯⋯⋯⋯⋯四级杆飞行时间呷萘坷胱于腔炝蚯杷岜锦籹谥势椎腂方法—/。
怛圜舄丁奕领舯辍淘日⒈:本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,:本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印,缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉皛/”作者签名:/⒉槐C艽眩日
第一章前言动态的,并不象基因组那样基本固定不变。因此要对生命的复杂活动钜斓鞍字首檠У难芯勘尘昂鸵庖随着人类基因组草图年的正式发表和几十种生物的全基因测序工作的结束,生命科学进入了后基因组时代,但传统的对单个蛋白质进行研究的方式已无法满足后基因组时代的要求。这是因为:虽基因的功能主要通过其编码的蛋白质来实现,但并不是一个基因一个蛋白质,如人的一个基因可编码种蛋白,人类基因组的基因可能生产出几十万个蛋白,生命现象的发生往往是多因素影响的,必然涉及到多个蛋白质。喔龅鞍字实牟斡胧墙恢赏绲模蚱叫发生,或呈级联因果。谥葱猩砉δ苁钡鞍字实谋硐质嵌嘌摹有全面和深入的认识,必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究。因此在上世纪年代中期,国际上产生了一门新兴学科一蛋白质组概念是在年由澳大利亚科学家和首次提出的,用来描述一个细胞、组织或有机体所表达的所有蛋白质阳嵌杂τ谝桓龌蜃榈乃械鞍字使钩傻恼澹细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式。虽然第一次提出蛋白质组概念是在年,但相关研究可以追溯到上世纪年代中期甚至更早,尤其是年代初,在基因组计划提出之前,就有人提出过类似的蛋白性相比,蛋白质组则具有可变、多样的特点,对于同一机体的各种细胞,其基因组是稳定的,而蛋白质组则各不相同,蛋白质组复杂多变管家蛋白外,多数蛋白参与功能行使,参与对环境刺激的反应,当细胞功能或细胞环境发