文档介绍：第一军医大学
博士学位论文
E2细胞诱导基因表达差异的蛋白质
组学研究
姓名:江培洲
申请学位级别:博士
专业:病理学
指导教师:姚开泰
20030601
隩分别及协同处理细胞诱导基因表达差异的蛋白质组掌研究研究生:江培洲导师:姚开泰教授中文摘要鼻咽癌是东南亚和我国南方省份发病率很高的一种特色癌,它具有明显的种族性和地域性。以往的研究表明,鼻咽癌的病因涉及病毒的感染、遗传因素、饮食和某些环境因素。尽管该肿瘤的发病机制尚未彻然而,要阐明鼻咽癌发生发展的机理。仅强调氡茄拾┑姆⑸密切相关是不够的,必然要涉及到其中的关键问题,即腥旧掀は胞如鼻咽上皮后的作用机制。但是长期以来,由于上皮细胞大多缺乏经典受体即疌谋泶铮苣迅腥旧螮,因而没有有效用于病毒感染的上皮细胞模型,陨掀は赴母腥疽鸬纳镅阅艿而成功使该细胞感染钦庵秩牍さ牟僮魅匀徊蛔阋圆飨赴然的感染机制及其诱发的生物学变化。因此,寻找一种有效的病毒自然理有着重要的意义。此外,环境因素如伏波醇訣的感染及鼻咽癌的发生的影响也备受关注。拇碳つ芄淮偈笶感染进而转化细胞以及牡理区域分布与含闹参锓植济飨韵喙氐戎ぞ菔沟醚芯空叨訲诱导底阐明,但随着研究的深入,诒茄拾┓⑸械淖饔迷嚼丛绞艿街视,有利于潜茄拾┲饕2∫虻闹ぞ菀苍嚼丛蕉唷变化无法得以清楚了解。这期间尽管有人给某些上皮细胞转染疌感染途径用于建立上皮细胞的腥灸P投圆鞅茄拾┑姆⑸⒄够上皮细胞生物学改变的机理倍感兴趣。因此,弄情砬昂笊掀は.
分化鳞癌上皮细胞株进行研究。根据前人的工作经验,感染与未感和:洗淼腃直鹜脚嘌恚缓笥糜诤笮笛椤实验表明病毒株在接触感染实验中能有效地使鼻咽癌上皮细为了揭示细胞在腥炯癟处理前后生物学特征变化的分该方法是通过双向电泳分离前述橄赴淖艿鞍字剩猛枷穹治趣的差异蛋白质点,胶内酶解后点样用于猅—检测,以测定所胞在分子水平上的表达差异,对阐明母腥炯氨茄拾┓⑸幕仆样有着重要意义。因此,我们用蚑分别及联合处理鼻咽上皮细胞,比较细胞在腥炯癟处理前后分子水平上的基因表达差异,从而寻找与它们的生物学性能相关的生物大分子,为阐明腥炯氨茄拾┓⑸幕理奠定基础。由于人正常鼻咽原代上皮材料来源很少,分离培养困难,传代增殖有限,无法满足实验的需要,并且有报道认为在正常条件下,荒芨腥疚醋;谋茄什苛圩瓷掀は赴虼宋颐悄庋∮帽茄什康染的细胞间接触培养及感染的方式是目前发现的新的腥痉椒ǎ此我们选用该法用于感染试验。腥炯癟作用的实验细胞分为四组,即未作任何处理的,淼腃琓处理的,胞感染肭叭擞闷渌腅《局杲薪哟ジ腥镜慕峁喾这提示了细胞间接触感染是建立苑⒏腥旧掀は赴哪P偷目尚蟹法。子机理,我们采用了新一代鉴定基因表达差异的技术一一功能蛋白质组学技术作为研究方法。软件对榈鞍字誓和计捉胁钜毂泶锏鞍字实姆治觯缓笄邢赂行得结果即肽指纹图谱为参数搜索蛋白质数据库—和袢∮泄氐鞍字市灾省⒈泶锉浠头牒笮奘渭庸情况等多方面信息,以期从整体上全面了解影响橄赴镄阅鼙浠.
内质网产生应激反应,促使细胞表达蛋白悦馐苡ど撕Γ拇砟芄灰种票茄拾┫赴鸆ぃ跋煜赴拇唬进细胞蛋白酶成分的增加以及改变细胞的形态。碳“疊”的表达,并阻断了“疊”的磷酸化,同时上调与分化及凋亡相关的蛋白“—糖异构酶在细胞中高表达,从而影响糖代谢;能引起蛋白酶成分脑黾樱淮俳《鞍譨的高表细胞经蚑分别处理后可引起许多蛋白质呈完全相反的趋势表达,而这些蛋白质在蚑协同处理的细胞中表达处于中间状态,暗示了谒拗飨赴诘牡骺鼗朴隩处理细胞诱发的调控机制之间有着某种抗衡、制约作用。的各种相关的功能蛋白质,从而为腥尽作用的机制及鼻咽癌我们将拍和甲鞅冉希⑾至瞬簧俨钜毂泶锏鞍椎悖⒂猅—技术成功鉴定了其中个点所属的蛋白质。根据所鉴定蛋白质的功能,结合实验所观察的细胞生物学特征的变化,我们认为:母腥究赡艽偈瓜赴罅亢铣捎肫涔δ芟喙氐牡鞍字剩⒂的高表达以适应蛋白质产量的增加,随后在能诱导与增生相关的蛋白、疊,功能未知的蛋白如谋泶铮荒苡盏嫉谋泶锝赡芗せ頝狵径:能下调蛋白—谋泶锢匆种葡赴只胞抑制了与分裂、增生相关的蛋白“”、的表达,从而抑制细胞的生长:此外,褂辗⒘肆姿岜达,进而引起细胞骨架结构和细胞形态的改变、细胞膜的变化。的发生发展机理提供有力依据。和分子伴侣白质如导.
谥琢鱿赴鸆斜泶锏拖拢谟杏盏分化作用的砗蟊泶锎蟠筇岣撸凳玖烁玫鞍卓赡苡氡茄关键词:爱波斯坦一巴尔病毒幌赴浣哟ジ腥荆凰虻缬荆褐蛋白质—上皮细胞的转化有关。谱;
:..!:.,瓵疌,琲.
瑆,甧.,琣畉痮琣,甊甌,甌琤,,甊瑃甌·琓
“琾猼痮狿狹,.瑂——瑆’’.猰,—,/琫,瑆,··琣
‘‘·╰’’“”,“疊”,.“”.‘‘疊”籪,瑆:瑃,‘‘”,瓽’’“’—‘‘痑’.瑃“疊”;“痶“’’籭.‘‘痑‘‘痺,;.
甌;甒篍·;·,—甌—眎琤—籺