文档介绍：细胞的活力测定细胞的活力测定( ( MTS MTS 法) 法) 实验四细胞活力: 在细胞群体中活细胞所占的百分比叫做细胞活力. 为什么要进行细胞活力的测定? ?由组织中分离细胞检查细胞活力以了解分离过程对细胞是否有损伤作用。?复苏后的细胞也要检查细胞活力,了解冻存和复苏的效果。?药物筛选等。实验目的 1、掌握 MTS 法测定细胞活力的原理和方法。 2、了解细胞活力测定的相关应用。 3、熟悉酶标仪的使用。 4、掌握血细胞计数板的计数方法和原理。实验原理染色排除法(最常用) 台盼蓝法:死细胞染成蓝色,活细胞不着色苯胺黑法:死细胞染成黑色,活细胞不着色荧光排除法: MTT 法:琥珀酸脱氢酶可将 MTT 还原为蓝紫色结晶颗粒,后者产量与活细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比,反应完成后测定 560nm 时的吸光度。 MTS 法的原理与 MTT 法相同(测定 490nm 吸光度值),灵敏度高,操作简单。。生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光;死亡细胞无荧光。细胞内酶与特定试剂的显色反应: 细胞活力鉴定的方法: 酶标仪实验内容 (CML) 细胞系的 IC 50. . IC 50( inhibitory concentration 50% ): 药物抑制细胞活力 50% 时的浓度。单位: nM,uM .?实验目的?实验原理?实验材料?实验步骤?实验报告线粒体超活染色与观察线粒体超活染色与观察实验材料 CML 细胞系,抗癌药物, 96 孔细胞培养板,100ul-1ml/20- 200ul 移液器, 离心管, MTS, PMS, 血细胞计数板,显微镜,酶标仪等。实验步骤 IC 50. 两个班分组进行,统计人数,共分 13 个组。取经梯度药物浓度( 对照, , , , , , ,5, 10 uM )处理 72 小时后的 CML 细胞系,每个浓度吸取 100ul 加入到 96 孔细胞培养板中(每个浓度设置 3个复孔),同时设置 3个空白对照(培养基) ,将 MTS 和 PMS 解冻后,按 MTS:PMS 体积比为 20 :1的比例混匀(先数一下有多少孔,再计算需要 MTS 和 PMS 的体积,配制时多配 3孔),每孔加入 20ul ,将细胞培养板置于细胞培养箱中培养 4个小时后,取出细胞培养板使用酶标仪测定 490nM 波长时的吸光度值,以实验对照(不加药)为 100% 活力,在 Excel 电子表格中作图(计算时各组吸光度值均先减去空白对照的吸光度值再进行计算),绘制药物作用曲线, X轴为不同药物浓度, Y轴为细胞的相对活力,并计算药物的 IC 50,评价药物的抗肿瘤活性。 . 取 CML 细胞系 1ml (细胞浓度约为 5* 10 6个/ml )于离心管中, 编号为第 1管;取 7个离心管编号为 2-7 管, 向第 2-7 管中分别加入 500ul 培养基;管 1颠倒混匀数次后,吸取 500ul 细胞加入到管 2,管 2颠倒混匀后吸取 500ul 细胞加入到管 3,依次类推直到第 7管;各管吸取 100ul 加入到 96 孔细胞培养板中(设置 3个复孔),同时设置 3个空白对照孔(培养基)。将 MTS 和 PMS 解冻后,按 20 :1的比例混匀,每孔加入 20ul ,将细胞培养板置于细胞培养箱中培养 4个小时后,取出细胞培养板使用酶标仪测定 490nM 波长时的吸光度值,绘制细胞浓度( X轴)和细胞活力( Y轴),分析细胞活力与活细胞数量是否呈正比? 注意: MTS 和 PMS 需避光,操作时需避光操作。