文档介绍：论文评阅人基于际醯闹泄戏饺巳焊味棺春吮湫缘耐槐浞治课题来源:“十一五力国家科技攻关计划课题一“重大出生缺陷和遗传病的防治’’翁獗嗪牛学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员医学遗传学徐湘民教授温子龙教授洪铭范教授韦相才教授高天明教授张文清教授刘誉教授月日广州的子课题专业称王利华南方医科大学级硕士学位论文名...................。...。。.......。..............。..一
\删基于际醯闹泄戏饺巳焊味棺春吮湫缘耐槐浞治硕士研究生:王利华师:徐湘民教授摘要导背景与目的肝豆状核变性又称病琖,是一种常染色体隐性遗传的铜代谢缺陷病,其基本代谢缺陷是肝脏不能正常合成铜蓝蛋白和自胆汁中铜排出量减少,导致铜在体内各脏器和组织中沉积阅院肝脏为主佣鹨幌盗械牧俅脖硐帧8味棺春吮湫缘牧俅脖硐中问蕉嘌以进行性肝脏损害、神经精神系统功能障碍、角膜边缘有铜盐色素沉着环,为主。该病在全球的发病率大约为携带者频率为辉谥泄貌〉姆⒉÷矢叽/ǖ赖牟±庸谏经系统单基因遗传病的首位,占神经遗传门诊的.%。肝豆状核变性是目前少数几个用药物治疗效果较好的单基因遗传病之一,治疗的重点在于早诊断、早治疗。然而,由于肝豆状核变性患者的临床表现形式多样,且早期症状一般比较隐匿,而铜生化检查结果在患者、杂合子和正常人之间存在%的重叠,这些因素常导致疾病的延误诊断。因此,对肝豆状核变性患者,尤其是一些临床表现不典型的病例进行基因诊断,对提高患者的生活质量具有重要意义。作为肝豆状核变性唯一的致病基因,蛴甓ㄎ徊⒖寺∮,其编码一种由霭被岵谢槌傻腜型铜转运即。鞍字饕S腥龉δ芮个铜离子结合区、虯酶功能区和隹缒すδ芮8味棺春吮湫曰颊叩耐槐湫问蕉嘌愿春显雍贤变为主,只有少数纯合突变;以少数几个常见突变为主,伴有广泛的罕见突变。硕士学位论文
材料与方法到目前为止,世界范围内报道的致病突变已经超过郑渲余种在中国人群中报道,这些突变主要累及虻腜型腹δ芮4送猓珹等位基因突变具有极大的遗传异质性,即不同国家、民族或地区的热点突变区和高频突变位点不同,如在欧美裔患者中,;中国人磐显子的瓵突变发生率最高,是亚洲患者的优势突变。因此,建立不同地区、不同民族的肝豆状核变性突变谱,有利于对肝豆患者尤其是一些症状前患者进行快速诊断。近年来发展起来的变性高效液相色谱际跻驯恢っ魇且恢志哂凶既贰⒏咝А⒕谩⒏咄俊半自动化等优点的用于检测已知突变和筛查未知突变的方法。觳饣突变的原理是基于部分变性条件下,异源双链和同源双链在饬刺卣魃系差异,使得它们在色谱柱中保留的时间不同而得以区分。与以往的变异检测技术,如变性梯度凝胶电泳珼、错配化学切割分析⒐瓜竺舾行阅旱缬珻、单链构象多态性分析琒等相比,哂薪细叩拿感性和特异性,目前已广泛应用于遗传性疾病的突变筛查和分子诊断。基于鲜鎏氐悖狙芯磕庥τ肞/际踅岷螪直接测序,对中国南方人群肝豆状核变性患者进行突变分析,建立我国南方人群肝豆状核变性的突变谱,从而为中国南方肝豆患者的遗传咨询、临床/产前诊断提供有用的信收集了来自于个无亲戚关系家庭的例临床诊断为肝豆状核变性的患者及其家属样本共N夜戏降厍鹤迦巳骸8味棺春吮湫缘牧俅中文摘要息。
结果与讨论诊断依据包括以下龇矫妫孩俚湫偷牧俅脖硐郑航悄ど爻磷呕瓼环急性或慢性肝脏损害,和/或震颤、肌僵直、构语障碍等锥体外系症状、体征;②常规的铜生化检查:血浆铜蓝蛋白水平降低疞∈蹦蛲判增加/。例患者的发病年龄为辏渲心行.%女性例;以肝型为主要表现的患者有例,以脑型为主要表现的患者例,还有硐治;旌闲汀4送猓美醋杂诒臼笛槭业例中国汉族正常人样本作为对照研究。采用经典的酚/氯仿法提取所有样品的外周血基因组肞反应扩增蛉ú勘嗦胄蛄屑坝胪庀宰优诘剪接区域,用际踔苯佣訮产物进行筛选,出现异常峰的样本经直接测序验证变异位点。应用际酰ü岳醋杂鑫耷灼莨叵导彝サ味棺春变性患者条染色体捌浼沂舻腁基因全部外显子进行突变筛查,我们共发现了种异常色谱峰形,苯硬庑蚍⑾终庑┮斐7逍斡种病突变和种多态组成。逍尉哂薪虾玫闹馗葱裕丛谕黄沃校相同突变的不同样本的色谱峰形极为相似。本研究建立的基于疍技术的肝豆状核变性未知突变筛查的分子诊断方法是一种快速、准确、高效、半自动化、高通量的突变检测技术,适用于遗传病的临床/产前诊断以及大规模的分子流行病学调查研究。本实验中检测的种致病突变包括种错义突变、旨艚游坏阃槐洹种无义突变以及忠坡胪槐洹U庑┩槐渲饕7植荚谕庀宰、、、、和。例患者中,有例检出鲋虏⊥槐洌例检出鲋虏⊥槐洌例患者仅检出一个突变以及醇斐鐾槐洹W艿娜旧逋槐浼斐雎饰.%/,其中位于外显子系耐槐湔甲芡槐涞/,居本研究突变检出率的第一位;外显子上的突变占总突变的.%居第二位;外显子上的突变占总突变的.%拥谌弧U馊硕士学位论文
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