文档介绍：山西医科大学
硕士学位论文
肝豆状核变性患者ATP7B 基因突变分析
姓名:李颖倩
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:石岩
2011-03-12
山西医科大学硕士学位论文
肝豆状核变性患者 ATP7B 基因突变分析
摘要
目的
肝豆状核变性( Hepatolenticular Degeneration, HLD),亦称 Wilson 病(Wilson disease,
WD),是一种伴随铜代谢障碍的常染色体隐性遗传性疾病,全世界发病率约为1︰30000~
100000。临床症状系由铜在体内蓄积所致,主要表现为肝功能异常、神经精神系统功能障
碍、角膜色素环及肾功能异常等。WD的致病基因为ATP7B,,截止目前
已发现其致病基因突变 400 余种,突变位点几乎遍布整个基因编码区。对WD的基因突变
的深入研究,有助于WD的早期诊断和治疗。本研究运用人类基因组 DNA提取、PCR扩增
及DNA序列分析等技术对 WD的致病基因 ATP7B 全部21 个外显子及邻近内含子区域进行
突变扫描,以获得确切的基因突变类型。初步分析WD 患者基因型与表型的关系,为WD 分
子病因学研究提供数据,有助于我省 WD 患者的基因诊断和遗传咨询。
方法
采集12 例WD 患者和50 名无血缘关系健康对照者的外周血,采用经典 Miller蛋白酶
K-氯化钠盐析法从其外周血白细胞中提取基因组 DNA,应用聚合酶链反应(PCR) 和DNA
直接测序技术对12 例WD 患者进行ATP7B 基因突变位点检测,同时应用限制性内切酶酶
切分析的方法证实发现的突变。参阅国内外已有研究和报道,应用统计学方法,初步分析
WD 基因型和表型间的关系。
结果
1. 本研究共检出 ATP7B 基因突变 4 个:R778L、A874V、T935M 和 P992L 均为已有
报道突变。
2. HpaII 酶切反应未发现健康对照者存在 R778L 突变。
3. 本研究共发现ATP7B 基因的SNPs 5个:A406S、L456V、L770L、K832R和2866-13
g>c。均已被NCBI 的SNP 数据库收录。
4. 本研究所检出的基因变异均为点突变。
5. 本研究中R778L 的突变率为 %。
6. Arg778Leu 突变和 Thr935Met 突变的患者与无该点突变的患者基因型与临床表型比
较 P>,临床表现未见明显差异。
结论
1. 本次研究再次证实 ATP7B 基因第8 外显子R778L 为高频突变位点,与前人研究一
致,说明R778L 也是山西省WD 患者的热点突变。
2. 临床上可用HpaII 酶切反应作为WD 患者初步筛选方法。
I
山西医科大学硕士学位论文
3. Arg778Leu 突变和Thr935Met 突变与临床表型在本研究中均未发现有相关性。
4. 本研究所得结果与前人只研究我国热点突变所得结果基本一致,对WD 的基因诊断
是否只进行热点突变的检测即可,有待于加大样本量进行确定。
关键词肝豆状核变性; ATP7B 基因;基因突变
II
山西医科大学硕士学位论文
ATP7B Gene Mutation Analysis in the Patients
with Wilson Disease
Abstract
Objective
Wilson disease (WD) is an autosomal recessive ic disease with copper metabolic barrier.
The worldwide prevalence of Wilson disease is estimated to be between 1 in 30, 000 and 1 in
100,000. Clinical symptoms caused by the toxic accumulation of overload copper in the body,
mainly for liver dysfunction, neuropsychiatric system dysfunction, Kayser–Fleischer ring and
abnormal renal function. Wilson disease is caused by mutations of ATP7B gene, located in
. To date, almost 400 variations reported as causative muta