文档介绍：中国医科大学
博士学位论文
hWNK4基因3'非翻译区及miR-296对基因表达调控的作用机制研
究
姓名:毛金媛
申请学位级别:博士
专业:遗传学
指导教师:赵彦艳
20091201
因的荻忧辛搜芯浚⑾謍瓣的启动子并不含有盒,它包含多通过这两个种苃删的转录活性。,非翻译区及对·中文论著摘要·刖切陆寺〉囊恢炙堪彼幔瞻彼岬鞍准っ傅编码基因,。研究表明主要作用于肾脏远曲小管和集合管上的多个离子转运体和离子通道,比如共转运体髓外钾离子通道琑、上皮钠通道珽,从而起到对体液离子平衡和血压的调控作用。目前大量的研究集中在的功能上,而基因调控机制仍不清楚。基因组包含编码序列和非编码序列,其中编码序列在人类基因组中所占比例不到ィ潜嗦胄蛄谐ァ9ズ艹ひ欢问奔淠谌衔U庑┓潜嗦胄蛄惺恰袄圾”,现在人们逐渐认识到这些非编码序列对基因的表达发挥着重要的调控作用,尤其是基因的’侧翼的非编码区。本研究组前期对个潜在的转录因子结合位点,比如、、.龊虲/等。,应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素可以增的乙酰化,增强其与反应元件的亲和力,从而影响启动子的活性,上调谋泶铩U庑┕赜趆基因的舳拥谋泶锏骺匮芯慷阐明高血压的发病机制有重要意义;然而,虻’非翻译区,牡骺刈饔闷裎醇ǖ馈吾,,、’.▲
司哂性銮孔幼饔茫煸碨舳踊晃M吹材料与方法结果微産,是近年来生物学研究的一个热点,是一类长度约谠葱缘チ捶潜嗦隦分子。研究表明ü骺鼗虮泶锊与了生命中的一系列重要过程,包括早期发育、细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡以及细胞死亡等。大部分实验证明动物ü氚谢騧’.煌全配对结合,在转录后水平负调控基因表达。因此,本研究拟重点探讨因的作用和功能。通过生物信息学、报告基因载体构建、.等实验技术验证的作用以及其上的潜在岷衔点,从而探讨参与基因表达调控的机制。在萤光素酶报告基因载体.∩希没蛑刈榧际豕菇ǘ嘀种粒,包括、籰—籰—一籰。利用分别转染人胚肾细胞系、人胃腺癌细胞系和人宫颈腺癌细胞系,应用.ü馑孛讣觳庀低臣觳庥ü馑孛傅幕钚浴Sτ萌旧骞瓜蟛痘技术观察肫舳拥脑陡艚换プ饔谩利用生物信息学软件对衜靶向预测。⒐。利用瞬时转染技术过表达或抑制泶铮ü萤光素酶报告基因、.癢印迹杂交等实验进行验证。⑼ü齍://..对多个哺乳动物的比较,蛄芯哂懈叨缺J匦裕鋂区一致性达%。⒃,发现动子后增强子作用仍存在,但是在各细胞中的作用强度不一致。⒂τ萌旧骞瓜蟛痘窦际豕鄄斓絟启动子和浯嬖谠陡交互作用,彼此可能在空间上相互靠近形成冉峁埂⒔幌盗泻’截短的舳雍停谋ǜ嬖靥宸直鹱H
结论胞中,发现在和细胞中过表达褂ü馑孛富钚韵陆担欢、和,发现甎对不同长度启动子的影响不同:对全长远佑性銮孔饔茫坏嵌舳踊久挥凶饔茫欢舳呈明显的抑制作用,提示銮孔雍’启动予区顺式反应元件对B加行同调节作用,。⒍宰H鞠赴┯雋启动子的刺激剂蛞种萍,不改变对增强子的作用趋势,同时箍商岣启动子增强作用的敏感性。⒂τ胢、等软件,在恢迷げ到一个慕岷衔坏悖溆胄∈蟆⒋笫蟆⒐泛吐淼耐葱愿叽ァ⒃贖赴幸种苖表达可使带有野生型序列的报告载体荧光素酶活性上升;过表达,使荧光素酶活性下降,而且不论是启动子还是启动子都有同样的作用。对带有突变型的报告载体给予同样的处理因素,荧光素酶活性基本没有变化。证实了靶向作用于,而且对基因的调节作用并不依赖于⒔玴和一沧H镜紿珺虷细胞中没有抑制作用,提示曰虮泶锏囊种谱饔镁哂邢赴⒔玴H镜紿赴校τ肦畉觳饽谠葱水平没有减低。将甒雙共转染到细胞中,应用检测鞍姿接邢陆担⒊始亮恳览敌裕崾谧B己笏揭种苃的表达。哂性銮孔幼饔茫⑶矣肫舳又浯嬖谠陡艚换プ饔茫某些转录因子及其结合位点可能是和启动子彼此连接的桥梁。.。谧B己笏揭种芖谋泶铩启动子。异性。矽三日◆巳
荆’非翻译区;增强子;换虮泶关键词
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