文档介绍：硕士学位论文中南大学分类号⋯⋯⋯⋯密缓⋯⋯⋯编号⋯⋯⋯论文题目::学科专业:研究生姓名:导师姓名及年
摘要微粒体是指细胞匀浆通过差速离心和蔗糖密度梯度离心,去除核白通过猵菘饧焖鞅蝗范ㄎD谥释逃械鞍住D谥释组分和线粒体组分后,获得的由破碎的内质网自我融合形成的近球形的膜囊泡状结构。大部分膜囊来自于内质网,也包括其他膜性细胞器的成分,如高尔基体、过氧化物酶体、内涵体、线粒体外膜、内吞小体,以及肝实质细胞、赴湍谄は赴闹誓ぁ<蚨灾微粒体代表的是主要来自于内质网的细胞内膜系统。内质网在细胞内起着重要作用,除了参与蛋白质的合成分泌和修饰加工外,还包括了一大部分参与糖代谢、脂代谢及生物转化的蛋白。因此,微粒体的蛋白质组学研究有助于阐明蛋白质一蛋白质和磷脂一蛋白质之间的相互作用,蛋白质的生物学功能以及结合于膜上的酶的功能特性等。本研究应用差速离心和蔗糖密度梯度离心从∈组织匀浆中抽提得到高纯度的微粒体。行实验以检验其纯度及污染物的含量。直接应用双向凝胶电泳技术一掷氪炕蟮母微粒体:同时考虑到构成微粒体的绝大部分为膜组分,而籇谀蛋白的分离方面有较大的困难,因此我们先用。。抽提出微粒体中的膜蛋白,再用一维际醴掷肽さ鞍住A街址椒ㄋ掷氲蛋白均由枰约ā2⒗蒙镄畔⒀ё试炊运ǖ鞍质的功能和亚细胞定位等进行分析。本研究初步建立了∈蟾挝⒘L宓鞍字时泶锲住V苯佣晕⒘体进行分离的参考胶上平均展示点数为±个。选取分辨较好的蛋白质点进行鉴定,鉴定出蛋白质觯渲龅—硕Ц堵畚中文摘要
ǔ龅鞍祝渲鑫Dさ鞍住<ǔ龅牡鞍字杏个定位于内质网上。内质网标志性膜蛋白:细胞色素和,种方法鉴定的蛋白质相互比较、整合,以全面及详尽地揭示∈肝微粒体的蛋白质组分。我们对鉴定的龅鞍赘菟堑难窍赴志性蛋白如、及黄咸侨WR泼前体均得到准确鉴定。。。处理后的微粒体膜组分经分离后,钙网蛋白,以及染患ā=定位及生物学功能进行了分类,初步建立了∈蟾挝⒘L灞泶谱。关键词:微粒体,蛋白质表达谱,质谱,双向凝胶电泳,膜蛋白硕十学位论文中文摘要Ⅱ
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缩写词简表队碱疏水性平均值三羟甲基氨基甲烷Ⅶ英文缩写英文名称中文名称双向凝胶电泳乙腈牛血清白蛋白丙基硫酸盐一二硫苏糖醇乙二胺四乙酸增强化学发光猅电喷雾四级杆飞行时问质谱葡萄糖调节蛋白热休克蛋白等电聚焦固相化梯度分子量质谱聚丙烯酰胺凝胶电泳等电点滑面内质网十二烷基磺酸钠十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳四甲基乙烯基二胺穿膜结构粗面内质网电压伏小时硕士学付论文琋,琋耵讧瓺瓼
前言本课题是贺福初院士领导下,国家苹弧爸泄死喔卧嗟鞍字首榧苹子课题“人类健康肝脏微粒体蛋白质组表达谱的建立”的一部分。这一部分是以∈一肝组织为样本,完善样本细胞破碎和分级抽提方法的实验条件,优化微粒体蛋白质裂解和抽提方法,籇橹さ鞍字食樘嶂柿浚苯小鼠肝脏微粒体蛋白质组表达谱,为进一步人类健康肝微粒体的抽提和蛋白质组表达谱的建立奠定基础。微粒体是指细胞匀浆通过差速离心和蔗糖密度梯度离心,去除核组分和线粒体组分后,获得的由破碎的内质网自我融合形成的近球形的膜囊泡状结构。大部分膜囊来自于内质网,也包括其他膜性细胞器的成分,如高尔基体、过氧化物酶体、内涵体、线粒体外膜、内吞小体,以及肝实质细胞、赴湍谄は胞的质膜。简而占之,微粒体代表的是主要来自于内质网的细胞内膜系统。内质网在细胞内起着重要作用,除了参与蛋白质的合成分泌和修饰加工外,还包括了一大部分参与脂代谢、糖代谢及生物转化的蛋白。因此,微粒体的研究有助于阐明蛋白质一蛋白质和磷脂一蛋白质之间的相互作用,蛋白质的生物学功能以及结合于膜上的酶的功能特性等“大鼠肝微粒体一直是许多实验室深入研究的亚细胞组分。二维凝胶电泳作为一种可同时分离大量的已知和未知蛋白质的方法,被广泛应用于各种组织及细胞蛋白质的分离中乜H欢诖煌⒌南赴校谥释呛凶罘岣荒そ峁沟细胞器。一般来说,膜蛋白大多为碱性疏水性蛋白,因此很难溶解于蛋白提取缓冲液中,并且容易在等电聚焦时发生沉淀。。直鹩及硕十学付论文‘
的方法行微粒体蛋白质的分离。含有丰富膜蛋白的微粒体膜囊同时经籇和狣蟹掷耄峁砻鱨—相对于獶掷肽谥释さ鞍子形蘅杀饶的优越性。在现有数据已知的个大鼠微粒体膜蛋白中,有个蛋白经由的方法得到鉴定,而籇姆椒ㄖ患个膜蛋白。研究者最后总结说,含有大量高度疏水性膜蛋白的亚细胞组分如微粒体等进行蛋白质组学研究时,应该的方法分离微粒体蛋白,尤其是姆掷搿将膜蛋白单独抽提出来行一维分离可提高膜蛋白分离的效率。膜蛋白的抽提有许多方法:碳酸盐法,变性剂法呱”,,碳酸盐法能将内腔蛋白及与膜结合不紧