文档介绍：北京协和医学院;中国医学科学院
博士学位论文
蛋白激酶抑制剂的筛选与活性化合物的分子药理学研究
姓名:张晶
申请学位级别:博士
专业:微生物与生化药学
指导教师:司书毅;王彦昶
20090601
摘要可逆性的磷酸化是细胞分裂受到精密调控的一个基本分子机制。已经证实蛋白激酶家族,如周期依赖性激酶、保罗样激酶和极光激酶韵殖调节中发挥着最重要的作用,研究的最为深入。人类的极光激酶家族包括三个成员和谟兴糠至阎泻推渌鞍仔⒒幼饔谩U饬礁黾っ讣易宥己为了更有效地筛选具有抗肿瘤作用的激酶抑制剂,本研究利用分子生物学方法,从细胞中提取总偻ü齊癙手段,得至蚉编码基因、目寺。灰匀死嘭和枳橹腸D0宓肗码基因目寺。≈柿!T俳ù似狭至表达载体甤校菇ㄖ刈楸泶镌靥澹⒆;拗骶鶨诱导表达后通过柱亲合层析对表达产物进行纯化,获得了比较高纯度的重组础。本研究还以酵母保罗样激酶蛋白的温度敏感型突变株为模式菌,应用孔微板培养澄清度观察法迮嘌累积筛选了份发酵液和个化合物,,生长受到抑制,野生型酵母却能正常生长;应用酶联免疫标记法检测奶逋釶种苹钚裕峁允綝能够以竞争型抑制的方式抑制的活性;应用ḿ彀腏对于细胞的毒性,发现芄灰种普饬街窒赴脑鲋常煌ü魇较赴羌觳垦芯緿对于酵母和肿瘤细胞周期的影响,结果发现梢越ń湍和细胞阻滞在/冢焕肁苡盏糀赴牡蛲觯挥τ昧魇较赴茄芯緿对细胞中蛋白的降解;利用计算机辅助进入的激酶活性中心并占据谖恢茫焕媒湍改P秃ǘ鯠同系物的生物活性进行了初步研究。实验结果首次证明了杂赑囊种苹钚允瞧淇怪琢龌钚缘闹匾T蛑弧酿酒酵母属于简单的单细胞真核生物,易于培养,且生长迅速,作为重要的模式生物在本研究中被用来初筛的抑制剂。利用这一筛选系统,,从而为靶向的药物筛选与活胞周期的调控起着重要作用。在哺乳动物中,保罗样激酶家族由四个高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成,它们有不同的亚细胞定位和功能,其中在细胞增癌症产生密切相关,被视为抗癌药物的潜在有力的靶点。蚉っ浮N9菇ㄈ旨っ敢种萍恋纳秆∧P偷於嘶旧ǚǚ⑾降解的影响,发现芤諷允綝北京协和医学院&中国医学科学院博士研究生学位论文。/、
性评价以及咔啉碱类衍生物作用机制的深入研究奠定了基础。关键词:保罗样激酶杭ü饧っ窤、患っ敢种萍粒嚎怪琢觯灰种萍辽秆∧P北京协和医学院&中国医学科学院博士研究生学位论文
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英文缩略语荧光活化细胞分类氨苄青霉素碱性磷酸酶过硫酸铵琠三磷酸腺苷琋亚甲双丙烯酰胺溴酚蓝牛血清白蛋白互补二甲基亚砜脱氧核苷三磷酸二硫苏糖醇乙二胺四乙酸二钠盐溴化乙锭胎牛血清炝蚯杷嵊ü’一一%籺北京协和医学院泄窖Э蒲г翰┦垦芯可宦畚
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刖世界卫生组织在年发布了有关全球疾病状况的最新评估报告,报告显示,心血管疾病、传染病和癌症是当前导致人类