文档介绍：四川大学
博士学位论文
5-FC对CD基因修饰的SHG-44恶性人脑胶质瘤细胞凋亡诱导作用
的研究
姓名:谢轩贵
申请学位级别:博士
专业:外科学(神经外科)
指导教师:游潮
20060401
常用缩略词表百,,二甲基噻唑.,’
声明论文成果归四川大学所有,特此声明。本人声明所交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的,申请人:指导教师:
对基因修饰的恶性人脑胶质瘤细胞凋亡诱导作用的研究摘要研究生:谢轩贵导师:游潮教授背景与目的:脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,尽管近年来在手术、放疗、化疗和免疫治疗等方面己取得很大进展,但疗效仍不乐观,晟媛什蛔ァK孀欧肿由镅У姆⒄购突蚬こ碳际醯慕步,使基因治疗胶质瘤成为可能,而自杀基因治疗是其中的一种重要方法。经典自杀基因一般编码非哺乳动物酶类,可将无毒的前药转变为高毒性代谢产物。因此,全身使用无毒性前药可导致肿瘤部位毒性药物产生并发挥抗肿瘤效应。胞嘧啶脱氨酶仅存在于酵母或细菌体内,哺乳动物细胞内不含该酶,它可将抗真菌药物奏瓼转变为抗肿瘤药物蜞奏本研究在离体状态下将基因转染裥匀四越褐柿鱿胞,建立/瓼陨被蛳低常航ü,以期为/瓼低吃谔逯瘟平褐柿鍪匝榇蛳禄。8弥瘟葡低尘】步入临床提供实验资料。方法:袢〉膒泶镏柿@┰霾⒊樘岽炕制性内切酶和盖屑╬柿!7直鹨許与启动子进行基因测序。
细胞凋亡的诱导作用。惺莶捎肧%。经筛选培养,周后获取抗性细胞克隆疌赴。免疫细胞化学试验检测疌赴鸆抗体表达。玈./和赴又值装迥冢加入含不同浓度的培养液培养。第觳捎贸9鍹法进行比色分析,确定活细胞比率。玈./细胞和细胞按一定比例混合,加入后彀碝法测细胞存活率,检测/自杀基因治疗系统是否存在“旁观者效应”。捎流式细胞仪、笛榉ḿ巴干涞缱酉晕⒕灯兰詓/.臣迫砑写结果:拗菩阅谇忻窧な礐虿入真核表达载体的多克隆位点。基因编码区为,与基因库收录序列完全一致。%疍嘌液中生长良好;通过脂质体将含基因的质粒转染进入细胞,秆』竦每剐钥寺./细胞,抗体免疫细胞化学染色显示/细胞成功地表达了。甅法显示:转染基因的疌赴诘团ǘ嘌悍跤天后,细胞出现明显死亡,为疞;而未转染的赴幻舾校琁嘉有显著性差异。蚐./细胞在作用下,形态学有明显不同,,疌赴虺鱿稚ひ种坪退劳觥./瓼自杀基因治疗系统存在“旁观者效应”,可以杀伤未转染的胶质瘤理。和甿/呦啾四川大学临床医学院专业学位博士论文疞
它们之间存在显著性差异。。细胞周期各时相分布出现变化螅。细胞周期分析显示瓼细胞,细胞存活率与两种细胞混合比例以及浓度密切相关,H綜虻腟疌细胞和细胞在含的培养液中培养允揪核黄染现象;透射电镜镜下可见/细胞出现凋亡特征性改变,但细胞未发现现象;流式细胞术检测显示,/,其凋亡率也随浓度的增加而递增,呈现出剂量依赖性,并且与对照组相比,//细胞阻止于期。谙赴跎佟结论:晒Φ亟⒘.恶性人脑胶质瘤细胞的/瓼陨被蛳低场固迕庖呦赴旧允疌赴晌榷ā⒏,而未转染的细胞为疞。通过“旁观者效应”可以杀伤未转染的胶质瘤细胞。。关键词:胞嘧啶脱氨酶;奏ぃ欢裥阅越褐柿觯换治疗;凋亡多数细胞胞核呈黄染表现,凋亡细胞比例极高,细胞则未见胞四川大学临床医学院专业学位博士论文
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