文档介绍：中国医科大学
硕士学位论文
锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡影响的研究
姓名:王元元
申请学位级别:硕士
专业:临床医学;神经病学
指导教师:车玉琴
201205
锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡影响的研究目的试验方法结果结论·中文论著摘要·法染色检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡的影量显著增多樽柿媳冉希罕,../组与/组比较,⒂肳法检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞蛋白表达的影响。⑼ü庖蹲靥崛∥锒匀四越褐柿鱿赴母稍ぃ鄄烊四越褐柿鱿赴蠵蛋白的表达。响。⒕庖蹲靥崛∥锒匀四越褐柿鱿赴蛲龅挠跋臁体外培养细胞,应用叶棕提取物进行预处理,应用ḿ觳庀赴凋亡,应用法检测蛋白表达水平变化。组与榫杉鸗阳性反应细胞即凋亡细胞,胞体缩小,形态不规则,胞核固缩浓染,呈棕黄色或棕褐色;橛组比较,、图、┳橛..痬┳楸冉希蛲鱿赴,.韑、图、图锯叶棕提取物预处理细胞组与对照组比较,蛋白表达水平显著降低,.、图、图’
关键词⒕庖蹲靥崛∥锬苡盏既四越褐柿鱿赴蛲觥⒕庖蹲靥崛∥镉盏既四越褐柿鱿赴蛲龅幕瓶赡苁峭ü断/藕抛5纪贰锯叶棕提取物:胶质瘤细胞;凋亡;/藕抛5纪
琻·英文论著摘要·,.甌、簆,甌.,、瑃瑃,,...痬甇/琧琫、.
、·;甋/面籙籥;/
·英文缩略语·
通路鼬信号转导通路忻飨砸览敌裕馐怪晌Q罢医褐柿鲋瘟菩路锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡影响的研究材料与方法一、实验材料、仪器和试剂⑾赴⒅饕J笛橐瞧·论文·刖舌神经胶质瘤亦称胶质细胞瘤,肿瘤起源于神经间质细胞,即神经胶质、室管膜、脉络丛上皮和神经实质细胞。成人发病率为颍年存活率%~%【欢ぁ9谧柿贤臣平褐柿稣贾惺嗌窬低持琢龅.%,平均.%【俊=褐柿龀式笮陨ぃ驼D宰橹挥忻飨越缦蓿质跄岩酝耆切除,对放疗及化疗不敏感,容易复发,因血脑屏障等因素的影响,化学药物疗效也不理想,因此脑胶质瘤至今仍是全身肿瘤中预后最差的肿瘤之一。研究发现,胶质瘤细胞对磷脂酰肌醇っ⑺堪彼幔瞻彼崃姿峒っ藕抛5法中一个具有吸引力的靶点疉信号通路可以从凋亡途径的激活、抗凋亡基因等方面影响细胞凋亡。等【晏岢龅蛲觯笥址⑾中矶嘁┪锟捎导细胞凋亡,特别是肿瘤细胞凋亡【>庖蹲,!巴棕”,属于棕榈科灌木植物,通常生长在南北美洲气候炎热的地区,其果实可供药用。有研究证明,锯叶棕提取物杏盏记傲邢侔┫赴⒍喾⑿怨撬枇鱿赴凋亡的作用,但目前尚无锯叶棕提取物诱导胶质瘤细胞凋亡的报道。本实验旨在研究锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响、并探讨其可能机制,以寻求胶质瘤治疗新靶点。人脑胶质瘤细胞株:河诒本┒⒐。细胞培养箱、超净工作台、倒置显微镜、光学显微镜、流式细胞仪、低温离
二、研究方法⒅饕J约梁鸵┢⒊9嫦赴嘌心机、.冰箱、恒温混匀器、微量加样器、超速台式离心机、细胞培养板、血细胞计数板、紫外分光光度仪、凝胶成像仪、垂直电泳装置、转膜装置、超声波细胞粉碎机。锯叶棕提取物涝瓷;蛲黾觳馐约梁北京鼎国昌盛公司单克隆抗体河氩┌律;兔抗.《鞍卓固购与博奥森公司培养液、胎牛血清籖;蛋白酶抑制剂.,琋琒;:甘氨酸和;昙堑难抗鼠抗体;发光液;显影液与定影液;胶片:医用湎呓浩;膜;印迹应用增强化学发光法试剂盒。将人脑胶质瘤细胞株置于含%的胎牛血清℃水浴分灭活嘌褐校⒓尤胧柿壳嗝顾兀疵顾痬嗝顾兀痬疵顾,在%氧化碳饱和湿度的恒温孵育箱中培养。倒置显微镜下观察细胞生长情况,及时更换培养液,ù淮,定期冻存和复苏细胞。赴ù琢鱿赴侍谏ぃ天,肿瘤细胞生%.%单层时,弃上清,,消化肿瘤细胞大约分钟,用倒置显微镜观察,当%的肿瘤细胞变圆时,即可用弯管吹打并将消化的细胞转移到离心管中,于转/分下,离心种樱上清,加少许培养基混匀,然后传代接种。赴炒嫜≡穸允て谙赴胖糜诶胄墓懿⒓剖胄#分,种樱コ傻呐嘌海尤肱渲坪玫亩炒媾嘌含%蚋油炒嬉褐邢赴淖钪张ǘ任./。用吸管轻轻吹打使细胞均匀,然后分装入无菌冻存管中,,冻存管移入液氮箱保存。赴此从液氮箱保存的细胞直接投入到℃温水中,快速融化,甇...
实验赴剖梦匏凭ɑゾ凭褰嗉剖寮白ㄓ酶遣F缓蟪径用培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液,于转/分,离心种樱锨澹用培养基混匀细胞沉淀,再转/分,离心种樱锨澹赴恋碛培养基混匀,备用。细胞复苏时细胞数可以做稀释,接种密度以痬为宜。布轻轻拭干。用吸管轻轻吹打细胞悬液,取少量细胞悬液,在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液,加样时不要溢出盖玻片也不能溢入两侧的玻璃槽内。在显微镜下,用锞倒鄄旒剖逅慕谴蠓礁裰械南赴<扑悖合赴辽原液蟾裣赴停《允て赨赴海赴ǘ任×痬又钟紫胞培养板中,每孔埃直鸺尤氩煌ǘ染庖蹲靥崛∥或培养小时,弃上清液。另一组同上继续培养小时。不同药物浓度设三个复孔,对照组不加药物,取平均